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| 1 | 旋毛虫新生幼虫cDNA文库的免疫筛选显示文摘目的 获取具有抗原性的旋毛虫新生幼虫基因。 方法 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针 ,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行免疫筛选 ,将获得的阳性克隆进行测序及分析。 结果 从 4 5× 10 5旋毛虫新生幼虫cDNA文库重组子中共获得 15 8个阳性克隆。序列分析结果表明 ,其中有 3 6个新的cDNA序列 ,已报道的序列有 5个 ,有 12个序列无开放阅读框架 (ORF) ,与旋毛虫线粒体基因组DNA同源。 | 吴秀萍 付宝权 刘明远 张亚兰 原丽红 李莲瑞 卢强 Pascal Boireau | 2004 | 中国寄生虫学与寄生虫病杂志2004，22，4： | 17 |
| 2 | 旋毛虫新生幼虫T668重组抗原对小鼠的保护性免疫显示文摘目的 研究旋毛虫新生幼虫T6 6 8重组抗原的免疫原性 ,制备基因工程疫苗。方法 以旋毛虫新生幼虫期特异性基因T6 6 8在大肠杆菌中的表达蛋白为抗原免疫小鼠 ,每间隔 10d免疫 1次 ,共免疫 3次。末次免疫后 10d ,每只小鼠攻击感染 2 0 0条旋毛虫感染性肌幼虫 ,感染后 5周用消化法检查肌幼虫 (ML)负荷。结果 T6 6 8重组抗原免疫组肌幼虫减虫率明显高于佐剂组和对照组。结论 T6 6 8重组抗原能诱导小鼠产生一定程度的保护性免疫 ,且可激发特异性体液免疫。 | 牛廷献 刘明远 卢强 付宝权 Pascal Boireau | 2005 | 免疫学杂志2005，21，1： | 9 |
| 3 | 旋毛虫Serpin基因的体外表达及其特性鉴定显示文摘目的体外表达旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serpin)基因,并检测其在旋毛虫不同发育时期mRNA转录、蛋白表达与分子定位及反应原性情况,为以其作为候选诊断抗原基因提供实验依据。方法根据旋毛虫Serpin基因序列,以重组质粒pBlue-script-WM5为模板,利用PCR技术去除其全长cDNA的信号肽序列,采用原核表达载体pET-28a构建不含该基因信号肽的、融合蛋白不含组氨酸标签的重组表达质粒pET-28a-WM5,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物纯化后,采用Westernblot法检测反应原性。免疫组织化学技术检测Serpin蛋白在旋毛虫不同发育时期的表达及定位情况。采用RT-PCR和实时定量RT-PCR技术检测Serpin基因在旋毛虫不同发育时期的转录水平。结果重组质粒pET-28a-WM5经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确,Serpin基因能够在大肠杆菌中高效表达。重组蛋白主要以包涵体形式存在,约占菌体总蛋白的51.1%。纯化后的重组蛋白纯度可达98%,与猪抗旋毛虫60d抗血清有较好的反应原性,与26d猪抗血清无明显反应信号;RT-PCR与实时定量RT-PCR结果显示,该基因在旋毛虫不同发育时期均有转录,但转录水平有明显差异,有2个转录高峰期(Ad2/Ad3和ML)以及1个转录水平明显下降期(Ad5);免疫组化鉴定表明,Serpin天然抗原在旋毛虫肌幼虫时期18d开始表达,且在感染35d后大量表达和分泌。结论已获得较高纯度的旋毛虫Serpin体外表达融合蛋白,其具有较好的反应原性。旋毛虫Serpin基因具有期特异性表达的特点,且在肌幼虫期具有高转录与高表达水平,可作为捕获旋毛虫肌幼虫期循环抗体的候选诊断抗原基因。 | 吴秀萍 于申业 刘相叶 王学林 杨勇 王子见 夏慧卿 邓洪宽 Boireau P 刘明远 | 2009 | 中国生物制品学杂志2009，22，2： | 7 |
| 4 | 旋毛虫成虫抗原基因的原核表达及表达产物的特性分析显示文摘目的 获得旋毛虫成虫抗原基因的原核表达产物并对其进行纯化及免疫特性分析。 方法 旋毛虫成虫Ts87基因片段亚克隆入 PET- 2 8a(+)表达载体 ,异丙基硫代 -β- D-半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。亲和层析和电洗脱法纯化表达产物 ,SDS- PAGE、 EL ISA和 Western blotting对表达产物进行分析鉴定 ,并将纯化的表达产物人工免疫兔。结果 SDS- PAGE结果显示 ,表达产物为分子量约为 4 0 k Da的重组蛋白。纯化后免疫兔获得高滴度的抗血清。该基因重组蛋白可被感染旋毛虫的猪、兔血清及人工免疫兔血清所识别 ,与感染囊尾蚴、棘球蚴的患者血清或感染日本血吸虫的兔血清不发生交叉免疫反应。 结论 获得一个新的旋毛虫成虫 Ts87基因重组蛋白 ,该蛋白具有特异的抗原性。 | 诸欣平 杨静 杨雅平 Pascal Boireau 詹斌 冯建军 Peter Hotez | 2003 | 中国寄生虫学与寄生虫病杂志2003，21，1： | 7 |
| 5 | 旋毛虫成虫期特异性基因的筛选与序列分析显示文摘目的 获得旋毛虫成虫期特异性基因序列。方法 应用旋毛虫成虫期特异性探针对成虫cDNA文库进行杂交筛选、克隆测序及核苷酸序列数据库 (GenBank)查寻比较 ,采用DNAstar软件进行基因序列分析。结果 利用消减杂交 (subtractedhybridization)获得的旋毛虫成虫期特异性探针筛选成虫cDNA文库 ,获得一个长 16 2 9bp的基因。其开放阅读框架由 146 4个核苷酸组成 ,编码 487个氨基酸。序列分析表明 ,该序列是一个尚未见报道的旋毛虫基因序列 ,在 2 0 7~ 2 70位氨基酸间存在两个锌指结构 ,在 5 2~ 6 4,10 8~ 116 ,137~ 16 3,2 2 6~ 2 6 0位氨基酸处存在预测的抗原表位。结论 获得旋毛虫成虫期特异性基因 。 | 杨静 诸欣平 张新梅 杨雅平 周蕾 高欣 刘明远 Boireau Pascal | 2001 | 中国寄生虫学与寄生虫病杂志2001，19，2： | 7 |
| 6 | 胞外捕获器:固有免疫细胞第三种防御机制的研究进展显示文摘胞外捕获器(extracellular traps,ETs)的释放是近来新发现的一种由DNA和颗粒蛋白组成的固有免疫防御机制。作为继吞噬作用、自噬之后的第三种杀伤机制,大量的研究已经证实ETs在体内外可捕获和杀伤绝大多数的细菌、病毒、真菌和寄生虫,作者对ETs的概念、形成的分子机制以及ETs在宿主防御中的作用进行了简要的介绍,这将对固有免疫细胞防御策略的新认识具有重要的意义。 | 廖成水 Boireau Pascal 刘明远 程相朝 | 2016 | 畜牧兽医学报2016，47，9： | 3 |
| 7 | 旋毛虫脱氧核糖核酸酶-Ⅱ酶活及酶活性位点的鉴定显示文摘以旋毛虫新生幼虫期(NBL)脱氧核糖核酸酶-Ⅱ(DNaseⅡ)基因家族中全长序列T31D4为研究对象,对其融合蛋白的核酸酶活性进行鉴定并摸索最佳酶切条件;通过序列分析预测其关键活性氨基酸位点,同时利用基因点突变技术对所预测的位点进行验证。结果表明:旋毛虫的DNaseⅡ具有核酸酶酶切活性,最佳酶切pH为5.0,同时发现其在中性(pH 7.0)及偏碱性(pH 8.0)下仍具有活性。利用Maga2软件对包括旋毛虫在内的以及业已发现的来自38个物种的DNaseⅡ的94个氨基酸序列进行比对,发现一个所有物种DNaseⅡ均高度保守的组氨酸位点,该结果与目前国际上所预测的DNaseⅡ关键活性氨基酸位点不同,目前国际上所预测的组氨酸位点在旋毛虫的DNaseⅡ序列中并非组氨酸(H),而是丝氨酸(S)或赖氨酸(K);通过点突变技术进一步验证这个组氨酸位点才是所有物种DNaseⅡ真正的活性氨基酸位点。同时推测旋毛虫的DNaseⅡ可能为一种新类型的DNaseⅡ。 | 吴秀萍 于录 王学林 龙明慧 Boireau P 刘明远 | 2010 | 吉林农业大学学报2010，32，2： | 3 |
| 8 | 旋毛虫G10-7基因在大肠杆菌中的高效表达显示文摘旋毛虫新生幼虫期特异性 G10 - 7基因从 PBK- CMV- G10 - 7重组质粒中亚克隆到 p ET- 2 8b(+)原核表达载体上 ,成功地构建了重组表达质粒 p ET- 2 8b- G10 - 7。将其转化到大肠杆菌 DE3感受态细胞中 ,经 IPTG诱导表达 ,其细菌裂解物经 SDS- PAGE电泳可检测到相对分子质量约为 34 0 0 0的目的蛋白带 ,且随诱导时间的延长蛋白表达量逐渐增加 ,诱导 4h达到峰值 ,薄层扫描结果显示 ,目的蛋白占菌体总蛋白的 6 1.7%。Western- blotting检测显示 ,此蛋白可被感染旋毛虫家猪阳性血清所识别 ,表明该蛋白具有良好的抗原性。 | 牛廷献 刘明远 卢强 付宝权 吴秀萍 郑明光 Pascal Boireau | 2002 | 中国兽医学报2002，22，5： | 3 |
| 9 | 旋毛虫pcDNA3.1/Ts87重组质粒的构建和表达显示文摘目的 构建和表达旋毛虫重组质粒。方法 PCR法在旋毛虫抗原基因Ts87两端加上合适的酶切位点和KOZAK序列,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建pcDNA3.1/Ts87重组质粒。采用Lipofectamine介导的细胞外源DNA转染法,把重组质粒导入COS7细胞。分别用肌肉注射和基因枪免疫小鼠。结果和结论 成功构建pcD-NA3.1/Ts87重组质粒,并在COS7细胞和BALB/c小鼠体内表达。 | 杨雅平 诸欣平 杨静 张路平 徐旭娜 黄松 Pascal Boireau | 2003 | 中国寄生虫学与寄生虫病杂志2003，21，2： | 2 |
| 10 | 旋毛虫抗原基因Ts88的克隆及鉴定显示文摘目的 获取旋毛虫具有抗原性的新基因。方法 应用旋毛虫免疫血清和人工感染血清对旋毛虫成虫cDNA文库约 3× 10 5重组噬菌斑进行筛选。基因克隆、DNA测序及 5′ -RACE获cDNA全长 ;采用ESEE、DNAstar软件及核苷酸序列数据库 (GenBank)进行cDNA序列分析。结果与结论 免疫筛选成虫cDNA文库 ,获得 3个阳性克隆。其中的Ts88克隆cDNA全长为 196 6bp ,编码 4 84个氨基酸 ,含有一个PWWP功能结构域及多个抗原表位。Ts88cDNA是一个尚未见报道的旋毛虫抗原新基因。 | 诸欣平 杨雅平 杨静 雷丽萍 Pascal Boireau | 2004 | 中国人兽共患病杂志2004，20，1： | 2 |
| 11 | 以重组蛋白为抗原的ELISA法检测旋毛虫抗体显示文摘目的寻求特异性强、敏感性高的旋毛虫病诊断抗原。方法以旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在E.coli高效表达的重组蛋白为抗原,分别以兔、猪和健康者血清及旋毛虫病阳性血清为一抗,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG、山羊抗猪IgG和山羊抗人IgG为二抗,建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法,并以旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(ES)抗原作为检测对照。结果以T668重组蛋白为抗原,对兔、猪和人旋毛虫病血清进行检测,阳性检出率为100%,且敏感性高(0.016μg/孔),与ES抗原检测结果完全一致。结论T668重组抗原有望替代ES抗原检测旋毛虫抗体。 | 牛廷献 潘菲菲 刘明远 卢强 付宝权 Pascal Boireau | 2005 | 中国寄生虫学与寄生虫病杂志2005，23，3： | 2 |
| 12 | 免疫筛选旋毛虫cDNA克隆及原核表达显示文摘目的 获取旋毛虫抗原的 c DNA克隆并进行蛋白的原核表达。 方法 应用兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清对旋毛虫成虫 c DNA文库进行筛选 ,并用兔人工感染旋毛虫血清对强阳性克隆进行再筛选。将编号为 Ts87阳性克隆的基因片段亚克隆入 PET- 2 8a( +)表达载体 ,IPTG诱导表达后用 SDS- PAGE电泳分析表达产物。 结果 免疫筛选获得阳性克隆 Ts87;成功构建重组表达质粒 PET- 2 8a( +) / Ts87。诱导表达该融合蛋白 ,SDS- PAGE电泳表明 ,其能表达一分子质量约为 40 ku的融合蛋白 ,与预测分子质量相符。 结论 筛选到 c DNA克隆 Ts87,与兔抗旋毛虫成虫可溶性全虫抗原血清和兔人工感染旋毛虫血清均产生特异性免疫反应 ;PET原核表达系统所获重组蛋白为蛋白功能研究奠定了基础。 | 杨静 诸欣平 杨雅平 周蕾 Pascal Boireau 詹斌 冯建军 Hotez Peter | 2003 | 中国寄生虫病防治杂志2003，16，1： | 2 |
| 13 | Polyaromatic hydrocarbon(PAH) distributions in the Senine River and its estuary显示文摘 | Fernandes MB Sicre MA Boireau A | 1997 | Marine Pollution Bulletin1997，34，11： | 1 |
| 14 | Site occupancy of divalent cobalt in fluorides : a powder ESR study 显示文摘 | Dance J M Boireau A Le Lirzin A | 1994 | Solid State Commun1994，91，6： | 1 |
| 15 | Polyaromatic hydrocarbon(PAH)distributions in the Seine River and its estuary显示文摘 | Fernandes M Sicre M A Boireau A | 1997 | Marine Pollution Bulletin1997，34，11： | 1 |
| 16 | Site occupancy of divalent cobalt in fluorides: a powder ESR study显示文摘 | Boireau A Le Lirzin A | 1994 | Solid State Commun1994，91，： | 1 |
| 17 | Trichinellosis in China: epidemiology and control显示文摘 | Liu Mingyuan and Pascal Boireau | 2002 | Trends in Parasitology2002，1812，： | 1 |
| 18 | Experimental studies in pigs on Trichinella detection in different diagnostic matrices 显示文摘 | Nockler K Serrano F J Boireau P | 2005 | Vet Parasitol2005，132，： | 1 |
| 19 | Polyaromatic hydrocarbon (PAH)distributions in the Senine River and its estuary显示文摘 | FERNANDES M B SICRE M A BOIREAU A | 1997 | Marine Pollution Bulletin1997，34，11： | 1 |
| 20 | 旋毛虫成虫期特异性基因全长cDNA的克隆与序列分析显示文摘目的 获取编码旋毛虫5日龄成虫(AD5)期特异性基因完整开放阅读框架(open reading frame,ORF)cD-NA分子。方法 利用地高辛标记的AD5期特异性cDNA片段T671作为探针对AD5 cDNA文库进行核酸杂交筛选,将筛选出的阳性克隆进行测序,利用分子生物学软件进行分析。结果 获得1个全长1132bp的cDNA分子,该cD-NA含有1个1032bp完整的ORF,该ORF编码1个343个氨基酸残基组成的多肽,其分子量理论推导值为35.1kDa,等电点(isoelectric point,IP)为4.8。InterProScan分析显示117~120氨基酸残基(SGYG)为粘多糖结合位点,27~86氨基酸残基为一线虫表皮胶原蛋白N-末端区结构域,153~328氨基酸残基为胶原蛋白螺旋三联体重复区(G-x-y)结构域。Signal PV2.0分析显示,在1~43氨基酸区域为信号肽。Blastn同源性分析表明,与其它已知生物基因序列无明显的同源性,为一新的cDNA分子。但与表皮胶原蛋白同源性较高,大于40%。结论 筛选获得一个新的编码AD5期特异性基因的完整ORF的cDNA分子。 | 付宝权 王峰 吴秀萍 牛廷献 卢强 刘明远 Pascal Boireau | 2003 | 中国寄生虫学与寄生虫病杂志2003，21，3： | 1 |
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