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| 1 | 猪PID1基因CDS区的克隆及其mRNA表达与肌内脂肪沉积关系显示文摘为了探索PID1(Phosphotyrosine interaction domain containing1)基因的表达与脂肪沉积的关系,文章利用兼并引物进行RT-PCR从猪脂肪和肌肉组织中克隆PID1基因CDS(Coding region)区全序列,并采用荧光定量PCR方法对大白猪、鲁莱黑猪、莱芜猪3个猪品种的肝脏、脂肪和肌肉组织PID1基因mRNA表达进行了相对定量分析。结果表明:经克隆、测序,得到了猪PID1基因654bp全编码区序列,通过Blast比对,与人、大鼠、牛有93.88%、66.94%、88.07%的同源性。PID1基因在同一个品种猪中mRNA表达水平总体表现为:肝脏>脂肪>肌肉。在不同品种3种组织中PID1基因mRNA表达水平总体表现为:莱芜猪>鲁莱黑猪>大白猪,其中肝脏中差异显著(P<0.05),但是在脂肪和肌肉组织中莱芜猪与鲁莱黑猪差异不显著(P>0.05)。对于高肌内脂肪(LWH)、中等肌内脂肪(LWI)和低肌内脂肪(LWL)沉积的3组莱芜猪,PID1基因在肝脏组织中的表达水平是LWH显著高于LWL(P<0.05),在肌肉组织中则是LWH显著高于LWI和LWL(P<0.05)。PID1基因在莱芜猪品种内3个组织中mRNA表达量与IMF含量相关均不显著,而在品种间3个组织中mRNA表达量与IMF含量呈显著正相关(P<0.05)。结果提示:PID1的表达可能与脂肪沉积性状存在一定的关系。 | 钱源 曾勇庆 杜金芳 崔景香 李华 陈其美 宋一萍 陈伟 | 2010 | 遗传2010，32，11： | 20 |
| 2 | 新基因NYGGF4在肥胖患儿脂肪组织中的表达验证及生物信息学分析显示文摘目的验证新基因NYGGF4在肥胖患儿脂肪组织中的表达,初步探讨NYGGF4的生物信息学特征。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术验证肥胖与健康儿童脂肪组织中NYGGF4基因的表达差异,应用DNA Star、Blast、ProtParam、SOPMA、TargetP、TMHMM、ProtScale、SOSUI、InterproScan和SMART等软件或数据库分析NYGGF4的核苷酸基本特征、蛋白质理化性质、二级结构、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、可溶性、结构域及亚细胞定位等。采用SPSS 11.0软件进行统计学分析。结果NYGGF4基因是一个未知的新基因,差异高表达于肥胖患儿脂肪组织中,生物信息学分析该基因cDNA全长1 527 bp,开放阅读框(ORF)长753 bp,编码250个氨基酸,预测相对分子质量28 271,定位在胞质,蛋白序列分析显示无跨膜螺旋结构,为一非分泌、可溶的亲水性蛋白,蛋白结构域分析提示NYGGF4的N端有一较短的亲脂性靶向序列、C端有一PTB结构域。结论NYGGF4基因是一差异高表达于肥胖患儿脂肪组织中的新基因,可能是胞质内一个信号转导分子,在肥胖的发生发展过程中发挥重要功能,有进一步研究的价值。 | 邱洁 郭锡熔 李晓南 王玢 倪毓辉 张敏 吴伟玲 陈荣华 | 2008 | 实用儿科临床杂志2008，23，7： | 18 |
| 3 | NYGGF4小鼠同源基因mRNA在遗传性ob/ob肥胖小鼠体内的表达显示文摘目的观察NYGGF4小鼠同源基因在遗传性ob/ob肥胖小鼠(以下简称ob/ob小鼠)与正常C57/BL6J小鼠脂肪组织中的差异表达,分析NYGGF4小鼠同源基因在ob/ob小鼠体内的多组织表达特征,探讨NYGGF4小鼠同源基因与肥胖之间的关系。方法雄性10周龄ob/ob小鼠、正常小鼠(对照组)各12只,以乌拉坦(0.4g/kg)深度麻醉后取腹膜后脂肪、肝、脑、骨骼肌、心肌、结肠、肾、小肠、肺、胸腺、脾等组织,采用RT-PCR技术检测NYGGF4小鼠同源基因的mRNA表达水平,比较NYGGF4小鼠同源基因在ob/ob小鼠与正常对照小鼠腹膜后脂肪组织中的差异表达及在ob/ob小鼠各组织中的表达。结果1.ob/ob小鼠体质量[(38.94±1.97)g]显著高于对照组小鼠[(18.47±0.66)g](P<0.001);2.NYGGF4小鼠同源基因在ob/ob小鼠腹膜后脂肪组织中的表达水平[(89.18±8.31)%]显著高于对照组小鼠[(56.84±9.54)%](P<0.001);3.NYGGF4小鼠同源基因在肝脏、脑、腹膜后脂肪、骨骼肌、心肌、结肠、肾脏等组织中均有表达,从高至低依次为肝脏>脑>腹膜后脂肪>骨骼肌>心肌>结肠>肾脏,虽在小肠、肺、胸腺、脾等组织中未检测到阳性信号,但总体上呈现多组织表达特征。结论NYGGF4小鼠同源基因可能参与肥胖发生的病理生理机制,并在肝脏、脑、腹膜后脂肪、骨骼肌等胰岛素作用的靶组织中表达水平相对较高。 | 夏黎 钱玲梅 孔祥清 倪毓辉 张春梅 童梅玲 池霞 吴伟玲 郭锡熔 | 2008 | 实用儿科临床杂志2008，23，19： | 16 |
| 4 | NYGGF4基因过表达对成熟脂肪细胞线粒体形态及动力学的影响显示文摘目的探讨NYGGF4基因过表达对成熟3T3-L1脂肪细胞线粒体形态及动力学的影响。方法以3T3-L1前体脂肪细胞为载体,建立NYGGF4基因稳定过表达细胞株,以空载质粒转染的细胞为对照,将前体脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞。采用透射电镜观察成熟脂肪细胞的线粒体形态,采用荧光定量PCR技术检测成熟脂肪细胞中线粒体融合基因(Mfn)1 mRNA、Mfn2 mRNA、线粒体动态相关基因(Drp)1 mRNA的表达水平。采用Western blot方法检测Mfn1蛋白、Mfn2蛋白、Drp1蛋白的表达水平。结果 1.电镜观察发现NYGGF4基因过表达的成熟脂肪细胞线粒体体积变小、数量明显减少,线粒体嵴断裂、减少、消失,部分线粒体肿胀,甚至呈空泡状;对照组成熟脂肪细胞的线粒体形态基本正常,线粒体嵴清晰可见,线粒体无明显肿胀、皱缩。2.NYGGF4基因过表达成熟脂肪细胞Mfn1 mRNA及Mfn1蛋白表达水平均显著高于对照组。3.NYGGF4基因过表达成熟脂肪细胞的Mfn2 mRNA、Drp1mRNA及相应蛋白表达水平与对照组比较差异均无统计学意义。结论在3T3-L1成熟脂肪细胞中,NYGGF4基因过表达可导致线粒体形态发生变化、数量减少,同时上调Mfn1 mRNA和Mfn1蛋白表达水平,提示NYGGF4基因在成熟脂肪细胞中过表达能影响细胞线粒体形态及动力学。 | 朱冠忠 张春梅 朱春 朱金改 赵亚萍 秦大妮 寇春兆 郭锡熔 | 2011 | 实用儿科临床杂志2011，26，7： | 11 |
| 5 | NYGGF4基因过表达对脂肪细胞胰岛素敏感性及分泌功能的影响显示文摘目的观察肥胖相关新基因NYGGF4过表达对脂肪细胞的胰岛素敏感性及分泌功能的影响。方法体外培养稳定转染NYGGF4基因(NYGGF4-pcDNA3.1)的3T3-L1前体脂肪细胞,以转染空载体(pcDNA3.1)的3T3-L1细胞为对照,胰岛素加地塞米松加1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MDI)方案诱导细胞分化成熟,液闪仪测定3H标记的葡萄糖摄取率,Westernblot检测葡萄糖转运体4(GLUT4)的表达及转位;采用ELISA双抗体夹心法检测培养上清中TNF-α、IL-6、脂联素、抵抗素4种细胞因子的水平。结果NYGGF4过表达显著降低胰岛素刺激的葡萄糖摄取率(P<0.05)。NYGGF4过表达对总的GLUT4的表达量没有影响,但明显降低胰岛素刺激的GLUT4由细胞浆向细胞膜的转位(P<0.05)。过表达NYGGF4的脂肪细胞其培养上清中TNF-α、IL-6、脂联素及抵抗素的分泌水平与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论NYGGF4基因过表达通过下调胰岛素刺激的GLUT4的转位而减少脂肪细胞的葡萄糖摄取率,提示脂肪细胞对胰岛素的敏感性降低,而对脂肪细胞的分泌功能无明显影响。 | 张春梅 邱洁 陈小慧 王玢 张敏 郭锡熔 | 2009 | 中国当代儿科杂志2009，11，10： | 9 |
| 6 | 极早早产儿早期持续鼻饲输注喂养预防胃肠外营养相关性胆汁淤积显示文摘目的探讨早期持续鼻饲输注喂养能否降低胎龄25~28周的极早早产儿胃肠外营养相关性胆汁淤积(PNAC)的发病率。方法 59例胎龄25~28周的极早早产儿在生后24 h分配到早期持续鼻饲输注喂养组(持续喂养组)或早期间歇推注喂养组(间歇喂养组),研究其PNAC发生率。结果持续喂养组婴儿PNAC发生率20.7%;间歇喂养组婴儿PNAC发生率46.7%(OR=0.298,95%CI 0.094~0.941,P=0.035),两组婴儿PNAC的发生率差异有统计学意义。结论早期持续鼻饲输注喂养较早期间歇推注喂养能降低胎龄25~28周的极早早产儿PNAC的发病率。 | 陈蓓 苏萍 韩进天 王岩 林广 | 2012 | 广东医学2012，33，15： | 8 |
| 7 | NYGGF4基因致胰岛素抵抗的线粒体解耦联机制显示文摘目的探讨线粒体解耦联机制在NYGGF4基因致胰岛素抵抗(IR)中的作用。方法以3T3-L1前体脂肪细胞为工具,建立NYGGF4基因稳定过表达细胞株,以空载质粒转染的细胞为对照,将前体脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,采用液闪仪检测成熟脂肪细胞对[3H]-2-脱氧葡萄糖的摄取率,采用荧光定量反转录-PCR技术检测成熟脂肪细胞中解耦联蛋白(UCP)2 mRNA、UCP4mRNA表达。采用线粒体特异性染料MitoTracker Red预染成熟脂肪细胞,激光共聚焦显微镜下观察线粒体膜电位,进一步应用流式细胞仪对荧光强度进行定量分析。结果 1.NYGGF4基因过表达脂肪细胞胰岛素刺激状态下的葡萄糖摄取率显著低于对照空载脂肪细胞,NYGGF4基因可显著降低成熟脂肪细胞胰岛素刺激下的葡萄糖摄取率;2.NYGGF4过表达脂肪细胞线粒体UCP2 mRNA、UCP4 mRNA表达显著高于对照空载脂肪细胞;3.NYGGF4过表达脂肪细胞线粒体膜电位低于空载脂肪细胞,但定量分析差异无统计学意义。结论 NYGGF4基因可以上调脂肪细胞线粒体UCP2 mRNA、UCP4 mRNA表达,线粒体解耦联异常可能参与NYGGF4致脂肪细胞线粒体功能障碍及IR的机制。 | 赵亚萍 王建国 陈小慧 高春林 季晨博 张春梅 郭锡熔 | 2010 | 实用儿科临床杂志2010，25，20： | 7 |
| 8 | NYGGF4(PID1)基因过表达对脂肪细胞中脂肪酸合成酶表达的影响显示文摘目的研究NYGGF4(PID1)基因过表达对脂肪细胞中脂肪酸合成酶(FASN)的影响。方法体外培养稳定转染NYGGF4(PID1)基因的3T3-L1前体脂肪细胞株[NYGGF4-pcDNA3.1(+)/myc-His B,A组]及空载体对照细胞株[pcDNA3.1(+)/myc-His B,C组],经1-甲基-3异丁基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素方案诱导分化为成熟脂肪细胞后,采用RT-PCR和Western blot法检测FASN基因mRNA和蛋白表达水平。结果与C组相比,A组成熟脂肪细胞FASN mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P<0.05)。结论 NYGGF4(PID1)基因过表达可能影响成熟脂肪细胞中脂肪酸的合成。 | 李娟 史春梅 季晨博 张春梅 朱金改 陈玲 郭锡熔 | 2012 | 江苏医药2012，38，19： | 6 |
| 9 | 人类肥胖相关新基因LYRM1的克隆及其生物信息学分析显示文摘目的克隆人类肥胖相关新基因LYRM1,并对其进行初步的生物信息学分析。方法以人网膜脂肪组织为模板,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人网膜脂肪组织中分离LYRM1基因的完整编码框,并将其克隆到TA克隆载体,RT-PCR法鉴定并测序。利用一系列生物信息学软件或数据库初步分析预测LYRM1基因及其编码蛋白的基因结构、染色体定位、蛋白质理化性质、二级结构、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、可溶性、结构域及亚细胞定位等。结果扩增出包含LYRM1基因开放阅读框的cDNA片段,采用RT-PCR及测序方法证实成功克隆出目的片段。生物信息学分析显示,LYRM1基因cDNA全长1589bp,开放阅读框长369bp,编码122个氨基酸,相对分子质量13270;定位于染色体16p11.2区域,含4个外显子和3个内含子。蛋白序列分析显示LYRM1基因编码蛋白无跨膜螺旋结构,为一非分泌蛋白。亚细胞定位分析提示其定位于胞核的可能性较大,蛋白结构域分析提示N端存在一LYR结构域,可能参与线粒体功能及能量代谢。蛋白序列比对提示LYRM1基因编码蛋白相对保守。结论LYRM1基因的成功克隆及生物信息学分析为进一步研究该基因奠定了基础。 | 邱洁 郭锡熔 周晓玉 程锐 张春梅 季晨博 高春林 张敏 | 2009 | 实用儿科临床杂志2009，24，19： | 5 |
| 10 | 肥胖相关新基因NYGGF4的系列研究显示文摘本研究小组前期以抑制性差减杂交技术筛选肥胖与健康人腹膜后脂肪组织中的差异表达基因,结果发现一条新基因在肥胖患儿脂肪组织中表达量明显升高,将其命名为NYGGF4。2006年以来本研究小组致力于该基因的功能研究,系统、全面地研究了该基因的生物学特性及功能,基因表达、调控的特点,现将这些系列研究进展作一综述。 | 余章斌 郭锡熔 | 2012 | 实用儿科临床杂志2012，27，1： | 5 |
| 11 | 藏鸡磷酸酪氨酸互作结构域1(PID1)的克隆及组织表达谱研究显示文摘本研究旨在阐明藏鸡PID1基因在不同组织与时序表达谱,并研究PID1基因表达与肌内脂肪含量(IMF)的关系。利用RT-PCR技术克隆藏鸡PID1基因,用相关软件预测PID1蛋白的结构和功能,采用荧光定量PCR研究PID1基因在藏鸡不同组织、不同日龄的表达谱,并分析其与IMF的相关性。结果显示,克隆得到藏鸡PID1基因序列长度为654bp(GenBank登录号:KT000001),共编码217个氨基酸,是具有PTB结构域的不稳定亲水酸性蛋白质;有14个磷酸化位点、4个O-糖基化位点、1个N-糖基化位点、7种保守特异性蛋白激酶结合位点、3个二硫键;预测其二级结构中α-螺旋占26.73%,β折叠占20.74%,无规则卷曲占52.53%,属于混合型蛋白且主要存在于细胞质中。荧光定量PCR结果显示,PID1基因在藏鸡的不同组织中均存在表达,且在脂肪组织中表达水平最高(P<0.01);时序表达谱结果显示,PID1基因在1日龄公藏鸡胸肌中表达水平最高。在210日龄的公鸡腿肌的表达量极显著高于其他日龄的表达水平(P<0.01),在119日龄母鸡腿肌的表达量极显著高于其他日龄表达水平(P<0.01)。在119和154日龄公鸡脂肪组织中表达水平较高,在210日龄母鸡脂肪组织中的表达量最高(P<0.01)。相关性分析结果显示,PID1mRNA的表达量与藏鸡胸肌的IMF含量存在显著相关(P<0.05)。结果提示,PID1基因可能是影响藏鸡IMF沉积的候选基因。 | 聂晓庆 林亚秋 徐亚欧 赵燕英 吕明 左璐璐 张小玉 李想 | 2016 | 畜牧兽医学报2016，47，6： | 5 |
| 12 | NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体的影响显示文摘目的观察NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体的影响。方法构建NYGGF4基因表达载体,转染3T3-L1前体脂肪细胞,G418筛选表达NYGGF4细胞株后,用RT-PCR及western blot技术验证,建立NYGGF4稳定过表达细胞株。用透射电镜观察NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体形态的影响,实时荧光定量PCR检测NYGGF4基因过表达及对照空载脂肪细胞中核转录因子PGC1α、NRF1、mtTFA mRNA含量。结果 RT-PCR及western blot均提示NYGGF4稳定过表达细胞株建立成功。NYGGF4基因过表达可以导致脂肪细胞线粒体形态异常,显著上调脂肪细胞PGC1αmRNA表达,对NRF1、mtTFA mRNA水平无明显影响。结论 NYGGF4基因过表达可以导致脂肪细胞线粒体损伤。 | 徐广峰 赵亚萍 陈小慧 高春林 王建国 郭锡熔 | 2011 | 临床检验杂志2011，29，4： | 4 |
| 13 | 游离脂肪酸对3T3-L1脂肪细胞糖代谢的影响显示文摘目的:通过培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导其分化至成熟,研究游离脂肪酸对脂肪细胞糖代谢的影响。方法:培养诱导3T3-L1脂肪细胞,用油红O染色鉴定并比较其形态结构的变化。LPS、EPA、SA、PA干预成熟脂肪细胞,收集不同时间的培养基,葡萄糖氧化酶法算出各组脂肪细胞的葡萄糖消耗量。用Western blot检测不同时间各组干预后细胞AMPK、GLUT4蛋白含量。结果:油红O染色鉴定成熟脂肪细胞胞浆中的脂滴染成红色,并出现'戒环'样结构;诱导分化第8天,90%以上细胞均分化成熟。含LPS、EPA、SA、PA的培养基作用于成熟脂肪细胞,随着时间的延长,显著抑制脂肪细胞对葡萄糖的吸收(P<0.05),同时,脂肪细胞AMPK、GLUT4蛋白含量在减少(P<0.05)。结论:游离脂肪酸可以诱导胰岛素抵抗的分子机制可能是通过胰岛素信号通路激活蛋白激酶(AMPK),进而影响GLUT4的蛋白表达,使脂肪细胞的葡萄糖吸收率减低,影响脂肪细胞的糖代谢。 | 陆环 张君 徐文静 卢慧 吴江东 米利古 谢建新 | 2010 | 现代生物医学进展2010，10，2： | 4 |
| 14 | 肥胖相关基因PID1的研究进展显示文摘人和动物脂肪代谢受到多种因素的调节,其中最重要的是遗传因素。磷酸酪氨酸互作结构域1(PID1)是近年来发现的新基因,作为一种信号分子在细胞生长和成脂过程中直接作用,在脂肪组织中都出现PID1的高表达现象,这就提示了PID1基因和脂肪沉积存在关系。本文将系统介绍PID1基因结构、编码产物特征以及其对肥胖影响作用机理及其研究进展。 | 徐洪刚 郑程莉 徐刚毅 | 2013 | 中国畜牧杂志2013，49，9： | 3 |
| 15 | STEAP4抗体干预对人前体脂肪细胞内活性氧、线粒体膜电位的影响显示文摘目的探讨STEAP4抗体干预对人前体脂肪细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位的影响。方法应用锥虫蓝活性试验对细胞活性进行检测,并进一步确定STEAP4抗体原液按1:250的比例稀释。体外培养人前体脂肪细胞,应用质量浓度为0.5g.L-1的STEAP4抗体,按1:250的比例稀释后(即质量浓度为0.125g.L-1)干预人前体脂肪细胞。应用激光共聚焦显微镜拍照,定性、定量分析ROS、线粒体膜电位变化。结果 STEAP4抗体按1:250比例稀释作用于人前体脂肪细胞后,可显著降低细胞活性;人前体脂肪细胞在STEAP4抗体按1:250稀释浓度干预下,细胞内ROS水平显著增加、线粒体膜电位水平显著降低,差异均有统计学意义(Pa<0.05)。结论 STEAP4抗体按1:250比例稀释后,作用于人前体脂肪细胞后可显著提高ROS水平、降低其线粒体膜电位,推测STEAP4基因影响胰岛素敏感性的机制可能涉及线粒体功能变化。 | 秦大妮 季晨博 朱春 寇春兆 朱金改 郭锡熔 | 2010 | 实用儿科临床杂志2010，25，19： | 3 |
| 16 | 人类肥胖相关新基因LYRM1原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达显示文摘目的构建人类肥胖相关新基因LYRM1原核表达载体,并获取LYRM1重组蛋白。方法采用RT-PCR技术从人网膜脂肪组织中扩增出LYRM1基因的完整编码框,将其亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代板乳糖苷(IPTG)诱导LYRM1融合蛋白的表达,利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)鉴定其表达。结果PCR、酶切鉴定及测序结果表明重组质粒构建正确。LYRM1基因在原核细胞中成功表达,经SDS-PAGE鉴定融合蛋白相对分子质量约为40000,主要以不可溶的包涵体形式存在于菌体沉淀中,Western blot分析表明融合蛋白具有免疫原性。结论成功扩增和克隆了人类肥胖相关新基因LYRM1,并通过构建其原核表达载体,使其在大肠杆菌中高效表达,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。 | 邱洁 郭锡熔 周晓玉 程锐 曹兴国 王玢 张敏 | 2010 | 实用儿科临床杂志2010，25，7： | 2 |
| 17 | 山羊PID1基因组织表达谱及其与肌内脂肪含量的相关性显示文摘为探索调控山羊脂肪沉积的关键基因表达规律,筛选影响山羊育肥性状的候选基因,选取0月龄、6月龄和12月龄安徽白山羊,屠宰后取背最长肌、腿肌和胸肌检测肌内脂肪含量,用荧光定量RT-PCR分析磷酸酪氨酸互作结构域1基因(PID1)在安徽白山羊的心、肝、脾、肺、肾、小肠、脂肪、腿肌、背最长肌和胸肌等组织中mRNA的发育性变化。随着月龄的增加,肌内脂肪含量持续上升;同月龄背最长肌肌内脂肪含量显著高于腿肌和胸肌(P<0.05)。PID1基因在心、肝、脾、肺、肾、小肠、脂肪、腿肌、背最长肌和胸肌中均有不同程度的表达,12月龄脂肪组织中的表达水平大于6月龄脂肪组织中的表达水平,且PIDI基因表达水平与背最长肌肌内脂肪含量呈显著相关(r=0.968,P<0.05)。说明PID1基因与脂肪沉积性状显著相关,是影响肉羊育肥性状的候选基因。 | 殷捷 凌英会 丁建平 王丽娟 张运海 章孝荣 | 2014 | 江苏农业学报2014，30，4： | 2 |
| 18 | 睾丸注射法制备携带猪PID1基因的转基因兔显示文摘目的研究磷酸酪氨酸互作结构域1(PID1)基因与肌内脂肪含量的关系,探究睾丸注射法在转基因动物制备中的可行性。方法将携带猪PID1基因的重组质粒pIRES2-acGFP-PID1与转染试剂共孵育后,对新西兰兔进行了睾丸打点注射试验。对繁殖的F1代个体进行了活体荧光检测、PCR和western blotting检测,以及抽样屠宰进行肌内脂肪含量等检测;将F1代阳性个体互交,繁殖了F2代兔,对其进行了阳性率检测以及肌内脂肪含量检测。结果外源PID1基因和荧光蛋白基因在后代中均成功表达,其中,F1代阳性率为35.88%,F2代阳性率为34.33%;转基因阳性兔与阴性和空白对照兔相比,PID1蛋白表达水平有所增加,肌内脂肪含量有显著提高(P<0.05)。结论 PID1基因与肌内脂肪沉积密切相关,同时,进一步证明了睾丸注射法可以用于制备转基因动物,且外源基因可以稳定遗传。 | 祝洪磊 石元 曾勇庆 陈伟 徐正刚 张哲 杨云 张天阳 | 2014 | 中国实验动物学报2014，22，2： | 2 |
| 19 | LYRM1基因沉默对成熟脂肪细胞线粒体形态及其相关基因的影响显示文摘目的探讨LYRM1基因沉默对成熟脂肪细胞线粒体形态及相关基因的影响。方法以3T3-L1前体脂肪细胞为工具细胞,建立LYRM1基因沉默细胞株,以转染空载质粒的3T3-L1脂肪细胞作为阴性对照,将前体脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,采用油红O染色观察脂肪细胞分化状态,采用透射电镜观察成熟脂肪细胞的线粒体形态,采用荧光定量PCR技术检测成熟脂肪细胞中线粒体融合基因(Mfn)1/2 mRNA、线粒体动态相关基因(Drp)1 mRNA、线粒体分裂基因(Fis)1 mRNA的表达水平。结果 1.油红O染色诱导分化第8天的脂肪细胞,发现85%以上脂肪细胞已分化为成熟脂肪细胞,细胞形态大而圆,胞质含大量被油红O染成亮红色的脂滴,比较发现2组细胞无论脂滴的大小、数量均无显著差异。2.透射电镜观察发现2组细胞的线粒体形态基本正常,线粒体无明显肿胀、皱缩,线粒体嵴清晰可见,2组细胞间线粒体数目无明显差异。3.LYRM1基因沉默成熟脂肪细胞的Mfn2 mRNA表达水平显著高于对照组成熟脂肪细胞。4.LYRM1基因沉默成熟脂肪细胞的Mfn1 mRNA、Drp1 mRNA和Fis1 mRNA表达水平与对照组成熟脂肪细胞的表达水平无明显差异。结论 LYRM1基因沉默能够引起成熟脂肪细胞Mfn2 mRNA表达水平升高,对线粒体形态结构并无显著影响,提示LYRM1基因沉默可部分影响成熟脂肪细胞线粒体形态相关基因。 | 朱冠忠 朱金改 史春梅 张敏 曹新国 郭锡熔 | 2012 | 实用儿科临床杂志2012，27，19： | 2 |
| 20 | STEAP4基因蛋白铁氧化还原酶活性分析显示文摘目的分析肥胖相关基因STEAP4的铁氧化还原酶活性。方法体外温箱培养昆虫细胞株(Sf9),分别将pAcSec1-STEAP4转移载体和pAcSec1-vector转移载体与SapphireTM杆状病毒基因组混合后共转染Sf9昆虫细胞,通过G418药物筛选稳定表达STEAP4蛋白的细胞株,并抽提细胞总蛋白进一步应用Western blot技术验证其转染情况。应用分光光度计法检测铁氧化还原酶活性。应用SPSS11.5软件进行统计学分析。结果 Western blot技术证实STEAP4过表达细胞株构建成功;分光光度计法检测STEAP4铁氧化还原酶活性,STEAP4过表达组A值为5.182 5±0.230 4,空载组A值为1.615 0±0.822 6,STEAP4过表达组铁氧化还原酶活性明显高于空载组,差异有统计学意义(Pa<0.001)。结论 STEAP4基因蛋白具有铁氧化还原酶活性。 | 秦大妮 季晨博 张春梅 史春梅 朱冠忠 郭锡熔 | 2011 | 实用儿科临床杂志2011，26，7： | 1 |
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