|
|
|
题名
|
作者
|
年代
|
出处
|
被引量
|
| 1 | 人源类溶菌酶蛋白6在毕赤酵母中的重组表达及活性分析显示文摘利用毕赤酵母(Pichia pastoris)重组表达人源类溶菌酶蛋白6(human lysozyme-like protein6,h Lyzl6),对其酶学性质进行分析。根据毕赤酵母密码子偏爱性设计并人工合成h Lyzl6基因,将其连接至含有乙醇氧化酶启动子(AOX1)的p PIC9K质粒构建重组表达载体p PIC9K-hlyzl6;重组表达载体经线性化后电转化入毕赤酵母GS115感受态细胞,经G418筛选获得高拷贝重组菌株后进行甲醇诱导表达。经甲醇诱导72 h后发酵液上清中酶活性达到最高值,发酵液上清经SDSPAGE检测在14.8 k Da处有重组h Lyzl6蛋白条带,分子量符合预期,通过甲壳素亲和层析可对其进行纯化;采用比浊法测定h Lyzl6酶学活性,结果表明h Lyzl6对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)有较好的杀灭作用,最适反应温度为40℃,最适p H为5.5,其酶活力为54 700U/mg,Cu2+对其活性有明显抑制,EC50为30.2799 mg/L。采用基因工程方法首次在毕赤酵母GS115成功表达了重组h Lyzl6,证实其在体外具有杀菌活性,初步揭示h Lyzl6在男性生殖系统先天性免疫中发挥了一定作用,为进一步研究h Lyzl6的功能和应用开发奠定了基础。 | 黄鹏 李文姝 谢君 鲍建瑛 曹晓娥 余龙 徐一新 | 2015 | 中国生物工程杂志2015，35，8： | 7 |
| 2 | 小鼠Lyzls的表达特征及人LYZL6蛋白的抗菌特性研究显示文摘C类溶菌酶基因(Lyzls)属于溶菌酶基因家族,高表达于小鼠睾丸和附睾。该家族基因Lyzl4和Spaca3被报道在小鼠精卵融合和受精过程中发挥作用。然而其他两种小鼠C类溶菌酶基因Lyzll他HLyzl6的功能尚不清楚。本研究分析了小鼠C类溶菌酶基因的组织表达、表达与雄激素的关联以及重组人LYZL6蛋白(rLYZL6)在免疫中可能发挥的作用。通过RT-PCR、Westernblots、免疫组织化学和免疫荧光的方法分析了Lyz&的表达,细菌集落形成测定实验分析了重组人LYZL6蛋白的抗菌活性。小鼠lyzls主要在睾丸和附睾中表达,受发育调控及雄激素或睾丸因子调控。免疫检测LYzL6蛋白定位于小鼠睾丸的初级精母细胞、圆形精子和成熟精子的顶体后及中段。重组人LYZL6蛋白呈现抗菌活性。我们推测Lyzls可能在精子线粒体的功能中发挥作用,LYZL6蛋白在雄性生殖道免疫中发挥作用。 | Jun Wei Shi-Jia Li Hui Shi Hai-Yan Wang Cheng-Ting Rong Peng Zhu Shao-Hua Jin Juan Liu Jian-Yuan Li | 2013 | Asian Journal of Andrology2013，15，6： | 5 |
| 3 | 人源类溶菌酶蛋白6在男性生殖系统中的表达显示文摘目的:检测人源类溶菌酶蛋白6(LYZL6)在男性生殖系统中的表达情况,以揭示其可能的生理功能。方法:将整合LYZL6编码基因的毕赤酵母菌株进行高密度培养,甲醇诱导表达后甲壳素亲和色谱纯化。采用双层琼脂平板扩散法观察重组LYZL6的杀菌活性。以纯化的重组蛋白为免疫原制备兔抗LYZL6多克隆抗体,ELISA检测抗体效价。通过Western印迹检测LYZL6蛋白在人各组织及精液中的分布,并采用免疫组化法确认LYZL6在人睾丸中的表达情况。结果:在低p H条件下重组LYZL6对溶壁微球菌杀菌活性较高。以重组LYZL6为免疫原制备的抗体具有高效价,Western印迹检测表明LYZL6仅在睾丸和附睾中表达,且睾丸表达水平较高。在人精子蛋白提取物中检测到了LYZL6,精浆中并未检测到明显蛋白条带。免疫组化检测显示在睾丸组织中,LYZL6定位于晚期精母细胞及圆形精子细胞。结论:在低p H条件下,重组LYZL6具有较强的溶解细菌细胞壁的能力;LYZL6被睾丸上皮分泌后结合于精子上,提示LYZL6有可能在精卵融合过程的某个环节发挥作用。 | 黄鹏 李文姝 杨智昉 徐一新 鲍建瑛 曹晓娥 周培华 李堃 余龙 | 2016 | 中华男科学杂志2016，22，7： | 3 |
| 4 | 不同月龄牦牛睾丸中LYZL4、LYZL6的基因表达及蛋白质定位显示文摘为探讨人源类溶菌酶蛋白4(Human lysozyme-like protein4,LYZL4)和人源类溶菌酶蛋白6(Human lysozyme-like protein 6,LYZL6)在牦牛睾丸中的表达机制,分别选取6、18、30、72月龄健康的牦牛12头(每组3头)采集睾丸组织。应用qRT-PCR、Western-blot和免疫组化技术分别分析了LYZL4和LYZL6在不同月龄牦牛睾丸中的表达和定位。结果显示,在不同月龄牦牛睾丸中均检测到 LYZL4、LYZL 6 基因和相关蛋白质的表达,其基因表达量随着牦牛月龄增加呈现上升趋势。72、30月龄牦牛睾丸中 LYZL4、LYZL 6 基因及蛋白质的表达量极显著高于6月龄和18月龄牦牛( P < 0.01)。LYZL4蛋白在6月龄牦牛睾丸中定位于间质细胞内,在18月龄牦牛睾丸中主要定位于精原细胞和支持细胞内,在30、72月龄牦牛睾丸中定位于圆形精子细胞内。而LYZL6蛋白在6月龄牦牛的睾丸中定位于间质细胞内,在18月龄牦牛睾丸中主要定位于精原细胞内,在30、72月龄牦牛睾丸中定位于圆形精子细胞和初级精母细胞内。 LYZL4和LYZL 6 基因主要在牦牛性成熟后高丰度表达,而在性成熟前相对低丰度表达。因此,在牦牛雄性生殖系统的发育过程以及在精子发生的调控过程中LYZL4和LYZL6均发挥着重要的作用。 | 李忠邦 阎萍 | 2019 | 河南农业科学2019，48，7： | 2 |
| 5 | 人源类溶菌酶蛋白4在受精过程中的作用及酶学性质研究显示文摘目的:对人源类溶菌酶蛋白4(LYZL4)在受精过程中的作用和重组蛋白的酶学性质进行研究,从而揭示LYZL4的生理功能。方法:细胞免疫荧光法检测LYZL4在精子细胞上的亚细胞定位,RT-PCR分析精子表面LYZL4的来源,通过精子穿透试验分析LYZL4在受精过程中的作用。构建真核重组表达载体p PIC9K-LYZL4,转化毕赤酵母GS115菌株后,甲醇诱导表达;甲壳素亲和层析和凝胶过滤层析从发酵上清中纯化重组LYZL4蛋白(rLYZL4),通过Western印迹进行验证。ELISA测定rLYZL4的透明质酸结合能力,分光光度法测定rLYZL4的胞壁质酶活性、透明质酸酶活性和自由基清除能力。结果:LYZL4免疫荧光定位于成熟精子头部的顶体膜上,RTPCR检测表明精子表面的LYZL4蛋白来源于睾丸和附睾的分泌,兔抗LYZL4多克隆抗体可明显抑制精卵结合。毕赤酵母表达系统成功表达了rLYZL4,酶活性分析显示rLYZL4无胞壁质酶和透明质酸酶活性,但能够结合透明质酸,并具有较强的自由基清除能力。结论:LYZL4由睾丸和附睾分泌后定位于成熟精子头部的顶体膜上,可在精卵结合过程中发挥作用,其还能够结合透明质酸并清除自由基,提示LYZL4可能作为一种多功能分子在精子保护及精卵结合过程中发挥作用。 | 黄鹏 钱能 杜望春 施尉珺 孙庆文 张宁 | 2018 | 中华男科学杂志2018，24，2： | 2 |
| 6 | Lyzl6基因在小鼠中的表达及其生物信息学分析显示文摘目的分析Lyzl6基因在小鼠中的表达特点。方法本研究通过RT.PCR实验明确Lyzl6基因在9、15、18、21、28、35d和6月龄小鼠睾丸中的表达变化及Lyzl6基因在成年小鼠各组织表达特点。采用多种生物信息学方法对该基因进行生物信息学分析。结果RT.PCR结果显示,Lyzl6基因在小鼠21d龄及之前的睾丸中没有表达,28d睾丸中开始持续高表达。Lyzl6基因在14种小鼠组织中呈现睾丸显著高表达。经生物信息学分析,Lyzl6蛋白属于典型的C型溶菌酶,是一种分泌蛋白,其蛋白的信号肽剪切位点在第19~20个氨基酸之间。小鼠和人Lyzl6蛋白氨基酸序列有高度相似性和同源性,显示该基因在哺乳动物中高度保守。结论Lyzl6基因为小鼠睾丸年龄依赖性表达基因,在小鼠睾丸中高表达,显示其可能在生精过程发挥重要作用。 | 张小悦 李家强 吴汉伟 江智茂 唐爱发 | 2013 | 中国男科学杂志2013，27，1： | 1 |
| 7 | 人源类溶菌酶蛋白6的功能研究及生理特性分析显示文摘对人源类溶菌酶蛋白6(human lysozyme-like protein 6,LYZL6)在受精过程中的作用进行研究,并对重组LYZL6蛋白(recombinant LYZL6,r LYZL6)的生理特性进行分析,从而揭示其生理功能。细胞免疫荧光法确定LYZL6定位于成熟精子头部的顶体后区域,反转录PCR(RT-PCR)分析表明精子表面的LYZL6蛋白来源于睾丸和附睾的分泌,Western blot法分析表明精子获能前后表面LYZL6的量无明显改变。半透明带结合实验和精子穿透实验分析表明兔抗LYZL6血清未明显抑制人精子结合透明带,但可明显抑制精卵融合。利用毕赤酵母表达系统成功表达了r LYZL6,使用甲壳素亲和层析和凝胶过滤层析可从发酵上清中纯化到具有生物活性的r LYZL6。酶联免疫吸附法(ELISA)分析显示r LYZL6不具有透明质酸结合能力、透明质酸水解能力和自由基清除活性,但具有较强的肽聚糖结合能力和异肽酶活性。LYZL6由睾丸和附睾分泌后定位于成熟精子头部的顶体后区域,可以参与精卵融合,并具有肽聚糖结合能力和异肽酶活性,提示LYZL6可能通过多种机制参与精子功能。 | 黄鹏 杜望春 施尉珺 饶玉良 孙庆文 张宁 | 2018 | 中国生物工程杂志2018，38，3： | 1 |
| 8 | Region-specific localization of IMDS-60 protein in mouse epididymis and its relationship with sperm maturation显示文摘精子通过 epididymis 在他们的运输期间获得前面的活动性和使肥沃的能力。这个成熟过程由一系列专业化区域在 epididymal 上皮分泌的不同蛋白质包含精子表面的修正。以前,我们的实验室报导了 IMDS-60 基因,它高度在老鼠语料库和尾 epididymidis 被表示。这里,推进 IMDS-60 蛋白质的描述表现,特定的 polyclonal antisera 被提起到 IMDS-60 蛋白质的 C 终端肽。西方的污点和 immunohistochemistry 试金表明那 IMDS-60 蛋白质在语料库和 epididymidis 的尾区域是明确地局部性的。IMDS-60 能从 epididymal 上皮被搬运到 epididymal 精子的表面。最后,抗体块实验的结果建议 IMDS-60 可能在 epididymis 在精子成熟起重要作用。 | Xiaoni Zhan Chunmei Wang Aihua Liul Qiang Liu Yonglian Zhang | 2012 | Acta Biochimica et Biophysica Sinica2012，44，11： | 0 |
| 9 | Lyzl1表达特性及基因敲除小鼠模型的建立显示文摘本试验旨在对Lyzl1在雄性小鼠的生殖系统中的表达特性进行初步研究,通过CRISPR/Cas9技术获得了Lyzl1敲除的小鼠模型,从而为进一步确定Lyzl1对雄性小鼠生殖功能的影响奠定基础。利用Real time PCR和Western blotting检测Lyzl1的表达情况。免疫组化检测Lyzl1基因在睾丸和附睾中的定位情况。免疫荧光检测Lyzl1在精子上的定位情况,为预测该基因功能奠定基础。利用CRISPR/Cas9系统,体外转录cas9和sg RNA,把cas9 mRNA和sg RNA按照一定的比例进行受精卵注射和胚胎移植,获得F0代Lyzl1突变小鼠,经过连续交配至F2代获得该基因敲除的纯合小鼠,以期进一步研究其与小鼠生殖的关系。为研究该基因功能提供依据。 | 赵秀玲 潘宏 陈东荣 张明 | 2019 | 基因组学与应用生物学2019，38，6： | 0 |
您所在的机构暂未开通此部分的功能，请联系管理员