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| 1 | 基因敲除小鼠技术的研究进展显示文摘基因敲除小鼠技术的建立和发展使得人们为研究基因的功能和寻找新的治疗人类疾病的靶点提供了强有力的支持。基因打靶和基因捕获是两种通过胚胎干细胞(Embryonicstemcell,ESC)构建基因敲除小鼠的技术。基因打靶通过同源重组替换内源基因从而敲除目的基因,而基因捕获则有启动子捕获和polyA捕获两种方法对目的基因进行敲除。近年来,有许多新的基因敲除技术不断被开发出来,包括Cre/loxP系统、CRISP/Cas9系统以及最新的ZFN技术和TAILEN技术,都有望取代传统基因敲除手段。文中简要阐述了如今新出现的几种基因敲除小鼠技术。 | 王超玄 孙航 | 2019 | 生物工程学报2019，35，5： | 15 |
| 2 | 细菌中CRISPR/Cas系统的应用和优化显示文摘成簇规律间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)系统在近年来得到越来越广泛的应用。相比传统的基因组编辑技术,CRISPR/Cas系统具有编辑效率高、特异性强、花费低、对实验技术要求低等优势。其中Ⅱ型和Ⅴ型CRISPR/Cas系统分别仅需要单个Cas9蛋白和单个Cpf1蛋白作为切割双链DNA的工具,因此特别受到研究者们的青睐。目前CRISPR/Cas9技术已成功应用于斑马鱼、小鼠、人类细胞等真核生物的基因组编辑中,并取得一系列重要成果,但在细菌领域进行的相关研究并不多。文中将简单描述CRISPR/Cas系统及其作用机制,重点介绍该系统的优化以及近年来其在细菌学领域所取得的进展。 | 傅俊豪 杨发誉 谢海华 谷峰 | 2019 | 生物工程学报2019，35，3： | 4 |
| 3 | CRISPR-Cas9基因编辑技术在肿瘤基因治疗中的研究进展显示文摘规律成簇间隔短回文重复CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeat)/CRISPR相关酶Cas(CRISPR-associated nuclease)系统是古细菌和细菌在与噬菌体抗争的进化过程中产生的抵御外源DNA入侵的一种适应性免疫机制,能有效识别并切割外源DNA.CRISPR-Cas9系统被开发成为新一代的基因编辑技术,相较于传统的锌指核酸酶(zinc-finger nucleases,ZFN)、转录激活因子样效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nucleases,TALEN)和胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)打靶技术,该技术操作简单,效率高,成本低,有着极其广阔的应用前景.目前,CRISPR-Cas9技术已经被广泛应用到恶性肿瘤的相关研究中.整理了近几年来有关CRISPR-Cas9基因编辑技术在恶性肿瘤基因治疗中的最新文献报道,并对其研究现状及进展作一综述. | 梅雯 杨勇琴 孙美涛 丁小倩 杨泽芳 张晓娟 熊伟 | 2018 | 平顶山学院学报2018，33，2： | 3 |
| 4 | CRISPR/Cas9敲除PLIN1基因增强3T3-L1脂肪细胞的脂解作用显示文摘应用CRISPR/Cas9技术敲除3T3-L1前脂肪细胞plin1,观察PLIN1缺失对脂肪细胞中脂肪水解的影响并探究可能机制。常规培养3T3-L1前脂肪细胞,电穿孔法转染plin1敲除载体,嘌呤霉素培养基挑选plin1敲除细胞,观察转染及筛选后的细胞存活率。'鸡尾酒'法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,酶法测定甘油和TG含量,油红O染色观察脂滴形态及数目的变化。Western blotting检测PLIN1、PPARγ、Fsp27和脂肪酶的蛋白表达;RT-PCR检测PLIN1和脂肪酶的mRNA表达。对照组细胞诱导分化后,微小脂滴数目较少,单房脂滴数目较多并围绕细胞核呈环型排列。相较于对照组,敲除组细胞诱导分化后微小脂滴数目增加,单房脂滴体积缩小,数目减少;细胞中PLIN1mRNA及蛋白表达被显著抑制(P<0.05);甘油水平显著上升(0.0984±0.0076),TG含量显著下降(0.0310±0.0053);HSL和ATGL两种脂肪酶的mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05);PPARγ和Fsp27的表达未有明显变化。上述结果表明plin1敲除后通过暴露脂滴中脂质以及上调脂肪酶等效应增强了3T3-L1脂肪细胞的脂解作用。 | 冯晨毅 许祥 董维鹏 陈朝阳 燕炯 | 2020 | 生物工程学报2020，36，7： | 3 |
| 5 | CRISPR/Cas9基因编辑技术在经脉脏腑相关研究中的应用探讨显示文摘CRISPR/Cas9基因编辑技术是近几年来生命科学、生物医学领域的重大发明,目前已成为从分子、基因水平探索经脉脏腑相关联系途径的重要方法之一。应用该技术能高效、快速、准确地构建符合研究目的的基因敲除动物,不仅能弥补以往研究中使用药物或损毁组织带来的不足,还可为全面开展经脉脏腑相关的现代研究启发思路。然而,CRISPR/Cas9的靶点专一性及相对较高的成本使其在经脉脏腑相关研究中的应用存在一定局限。因此,基因编辑应将目标聚焦于靶向明确且具有重要临床应用价值的体表内脏相关研究上。 | 左海燕 吴生兵 吴欣 王堃 瞿巧钰 朱超 王言玲 童艳 周美启 | 2022 | 中华中医药学刊2022，40，7： | 2 |
| 6 | CRISPR/Cas9基因编辑技术在宫颈癌研究中的应用显示文摘CRISPR( clustered regularly interspaced short palindromic repeats)是生命进化史中,细菌为抵抗噬菌体而获得的特有的适应性免疫系统(adaptive immune system)。 | 陈千一 | 2017 | 徐州医科大学学报2017，37，6： | 1 |
| 7 | 面向非生物学专业的CRISPR/Cas9基因编辑实验教学的设计与实践显示文摘文章以CRISPR/Cas9基因编辑技术为基础,设计了面向非生物专业学生的“利用基因编辑技术建立靶基因敲除细胞系”实验课程。实验包括验证性和探索性内容,整合了生物信息学、分子生物学、细胞生物学、基因工程等多学科知识点,有利于加强学生对相关生命科学知识的理解,有利于提高学生综合实验设计能力和培养创新精神。 | 顾宁 曲有鹏 朱瑞娇 王长林 宋金柱 韩放 | 2023 | 实验技术与管理2023，40，4： | 0 |
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