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| 1 | 荧光定量PCR仪光学校准方法与结果分析显示文摘实时荧光定量PCR仪特异性更强,自动化程度更高,且有效地解决了PCR污染的问题,应用领域及应用量都不断增加。但其设计更为复杂,温度模块和光学系统设计同时影响其性能和实验准确性,为定量PCR仪校准带来了巨大挑战。采用生物试剂等方式对定量PCR仪荧光部分校准缺乏溯源性,无法分析误差来源,存在较大缺陷。本文在对定量PCR仪影响因素和校准现状分析的基础上,采用Cyclertest 3D optical定量PCR仪光学校准系统对ABI 7500 Fast Real-Time定量PCR仪的温场部分和荧光系统进行了检测并对检测结果进行了分析,结果表明对温度模块和光学系统共同进行检测并分析相关性能够更科学全面地评估定量PCR仪性能,满足定量PCR仪校准需求。 | 祝天宇 许开设 张弓 李征 薛诚 | 2019 | 计量与测试技术2019，46，9： | 15 |
| 2 | PCR-HRM方法分析16S rRNA基因进行细菌鉴定的可行性研究显示文摘目的建立一种基于16S rRNA基因进行聚合酶链式-高分辨率熔解曲线(PCR-HRM)分析方法,用于快速鉴定临床常见感染细菌。方法收集中国人民解放军北部战区总医院2017年8月~2018年10月期间临床分离的167株常见细菌,选取16S rRNA三个高度保守区域(V1,V3,V6)基因序列用于引物设计,在含有饱和荧光染料的体系中进行PCR-HRM分析以区分不同细菌种属。将167株实验菌分为葡萄球菌、链球菌、非发酵阴性杆菌以及其它常见临床分离菌四组进行实验,分别进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和PCR-HRM分析并对结果进行对比,不一致的鉴定结果以测序为金标准。同时进行PCR-HRM方法鉴定临床常见病原菌的灵敏度、重复性和盲法验证试验。结果 PCR-HRM方法与MALDI-TOF MS对167株临床常见分离菌鉴定正确率分别为98.2%和97.0%,这两种方法无明显统计学差异(χ^2=1.97,P=0.727>0.05)。PCR-HRM方法可检测2 pg/μl的模板浓度;将6株革兰阴性菌分成一式三份同时进行PCR-HRM重复性试验,同种实验菌的三份熔解曲线图完全聚类;其盲法验证实验准确率100%。结论该方法通过使用3对16S rRNA引物构造多重差异曲线可对临床常见细菌进行分类到属级甚至种级,且灵敏度高、特异度强,可以作为鉴定临床常见感染菌的新选择。 | 邱会茹 王佳琳 薛文成 杨婧 任微 | 2019 | 现代检验医学杂志2019，34，3： | 6 |
| 3 | 应用PCR-HRM技术快速筛查MMACHC基因热点致病变异c.609G>A显示文摘目的对2个钴胺素代谢障碍C型(Cobalamin C,cblC)家系进行基因变异分析,在明确变异的基础上建立针对MMACHC基因热点致病变异c.609G>A的聚合酶链反应-高分辨熔解曲线(high-resolution melting,HRM)快速筛查方法。方法提取先证者及父母外周血基因组DNA;采用PCR-Sanger测序技术对cblC家系的MMACHC基因进行变异分析;通过PCR-HRM技术筛查100名健康儿童MMACHC基因变异c.609G>A。结果经Sanger测序确认先证者1 MMACHC基因存在c.394C>T和c.609G>A复合杂合变异,先证者2 MMACHC基因存在c.482G>A和c.609G>A复合杂合变异。先证者及100名健康儿童PCR-HRM分析结果与Sanger测序结果一致。结论c.609G>A是MMACHC基因的热点致病变异,利用PCR-HRM技术对其进行筛查是cblC获得快速基因诊断有效方法。 | 林书祥 王朝 张新杰 徐晓薇 邹倩倩 蔡春泉 张玉琴 舒剑波 | 2020 | 中华医学遗传学杂志2020，37，7： | 2 |
| 4 | 高分辨熔解曲线分析技术临床应用研究进展显示文摘高分辨熔解曲线分析技术(HRM)是在2002年由Utah大学Wittwer实验室和Idaho公司合作研发,它的原理是在PCR基础上加入饱和荧光染料、监测扩增产物熔解曲线变化的新兴核酸分析技术[1]。高分辨熔解曲线分析技术已经应用到临床的各个领域,对遗传病、肿瘤的诊断和细菌的鉴定及药敏试验、药物的鉴定等发挥了重要作用。 | 李宗波 | 2020 | 临床医药实践2020，29，2： | 2 |
| 5 | 牛脊柱畸形综合征HRM-非标记探针检测方法的建立与应用显示文摘为建立用于牛脊柱畸形综合征(CVM)检测的高分辨率熔解曲线(HRM)非标记探针法,根据Gen Bank中SLC35A3基因序列设计PCR引物及非标记性探针,构建G/G型、G/T型、T/T型3种标准质粒,利用质粒作为标准品建立HRM特征图谱。采用优化的HRM-非标记探针法对305份荷斯坦奶牛血样及冷冻精液样品中SLC35A3位点的基因型进行检测,同时采用测序法进行验证。结果,305份样本中9份冻精样本为CVM携带者,携带率为2.95%,检测结果与测序法检测结果一致,准确率达100%。上述研究结果表明,本研究建立的针对牛CVM中SLC35A3基因G-T位点突变检测的HRM-非标记探针方法是一种简单快速、灵敏特异、高效准确的牛CVM有害基因分型检测技术。 | 苏锐 郭鹏 何江 韩泽洲 王曦 | 2018 | 中国兽医科学2018，48，10： | 2 |
| 6 | 核酸扩增实时检测荧光染料的研究进展显示文摘核酸扩增反应能够在短时间内将特定DNA模板的数量增加106~109倍,显著提高微量核酸检测的灵敏度,但同时扩增产物的遗漏极易造成交叉污染,影响后续检测。扩增反应通过添加荧光染料实现的实时闭管检测,不仅可以避免反应结束后开管操作所导致的交叉污染,还可以通过反应动力学对样品中模板的起始拷贝数定量,以及通过熔解曲线分析鉴别多种靶标来源、进行基因突变扫描和基因分型检测。目前常用的商业化实时检测荧光染料,如SYBR Green I、Eva Green等,其精确结构信息尚未披露,因此只能通过实验“试错法”选取合适染料,无法从根本上获知染料结构和分析性能之间的关系。本文将通过对目前常用的核酸实时检测荧光染料性质和应用进行总结,为其优化选择、设计和开发提供参考依据。 | 邱婷 毛国斌 徐秦峰 | 2023 | 分析科学学报2023，39，4： | 0 |
| 7 | 多重PCR高分辨熔解分析同时检测骨髓增殖性肿瘤JAK2,MPL及CALR基因突变的初步研究显示文摘目的建立同时检测经典骨髓增殖性肿瘤患者中常见的Janus激酶2(Janus kinase2,JAK2)、钙网素(calreticulin,CALR)和骨髓增殖性白血病病毒(myeloproliferative leukemia virus,MPL)基因突变的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-高分辨熔解分析(high resolution melting analysis,HRM)体系。方法先以各个合成的突变等位基因片段为模板分别进行PCR和HRM分析,优化PCR体系后,在单管中进行多重PCR扩增和HRM分析,同时检测上述三个基因的8种常见突变。结果在适宜的条件下,上述三个基因的野生型和突变型均能扩增出各自的目的条带和收集到可区分的熔解峰,野生型与突变型的熔解温度差为0.3℃~2.0℃。多重PCR-HRM体系中,除JAK2外显子12相关片段,其他基因均可有效扩增,但JAK2 V617F突变型的扩增效率明显低于MPL及CALR基因。结论目前该多重PCR-HRM检测体系可鉴别MPL和CALR基因常见突变,但JAK2 V617F突变型由于扩增效率低导致突变峰与野生峰不能明显区分,JAK2V617F和外显子12的引物需重新设计。 | 杨晓慧 许蕾 晏耀明 李建新 | 2023 | 现代检验医学杂志2023，38，4： | 0 |
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