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| 1 | 肝细胞生长因子修饰的人脂肪间充质干细胞外泌体对糖尿病小鼠全层皮肤缺损的作用显示文摘目的探讨肝细胞生长因子(HGF)修饰的人脂肪间充质干细胞(ADSC)外泌体对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面的作用及其机制。方法采用实验研究方法。取2021年2—5月于空军军医大学第一附属医院整形科行腹部手术的3名健康女性(10~25岁)废弃脂肪组织,采用胶原酶消化法获取原代ADSC,培养7 d,用倒置相差显微镜观察细胞形态。取第3代ADSC,转染HGF慢病毒,培养5 d,采用成像系统观察细胞荧光情况并计算转染率。取第3~6代ADSC和第3~6代转染HGF的ADSC,均分别采用密度梯度离心法提取其外泌体,即为ADSC外泌体和HGF-ADSC外泌体。采用透射电子显微镜观察外泌体微观形态,采用流式细胞仪检测外泌体的CD9、CD63、CD81阳性表达。取24只6周龄雄性昆明小鼠,制作糖尿病模型后,在其背部制作全层皮肤缺损创面。按照随机数字表法将小鼠分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、单纯HGF组、单纯ADSC外泌体组和HGF-ADSC外泌体组,每组6只,分别作相应处理。伤后3、7、10、14 d,观察创面愈合情况并计算其愈合率,使用多普勒血流仪检测创基血流强度并计算伤后10 d创基相对血流强度百分比。伤后10 d,采用免疫荧光法检测创面中Ki67阳性细胞数,采用免疫组织化学法检测创面中CD31阳性染色且成管样结构的新生血管数,采用蛋白质印迹法检测创面中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达并计算p-PI3K与PI3K比值及p-Akt与Akt比值。伤后14 d,采用苏木精-伊红染色法、Masson染色法分别检测创面皮肤组织缺损长度及胶原新生情况,并计算胶原容积分数(CVF)。样本数均为3。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析及Tukey检验。结果原代ADSC培养7 d,细胞呈梭形,生长密集后呈旋涡状排列。培养5 d后,第3代转染HGF的ADSC携带绿色荧光,转染率为85%。ADSC外泌体及HGF-ADSC外泌体微观形态相似,均呈囊泡状结构,平均粒径分别为103、98 nm,均呈CD9、CD63、CD81阳性。伤后3 d,4组小鼠创面的创周均红肿且有少量渗液;伤后7 d,HGF-ADSC外泌体组创面逐渐缩小,其余3组创面缩小不明显;伤后10 d,4组创面均缩小、结痂;伤后14 d,HGF-ADSC外泌体组创面基本愈合,其余3组均有残余创面。伤后3 d,4组创面愈合率接近(P>0.05);伤后7、10 d,HGF-ADSC外泌体组创面愈合率均分别明显高于PBS组、单纯HGF组及单纯ADSC外泌体组(q值分别为13.11、13.11、11.89,12.85、11.28、7.74,P<0.01);伤后14 d,HGF-ADSC外泌体组创面愈合率明显高于PBS组、单纯HGF组及单纯ADSC外泌体组(q值分别为15.50、11.64、6.36,P值均<0.01)。伤后3 d,4组小鼠创基均无明显血运;伤后7 d,HGF-ADSC外泌体组创基开始有微血管形成,其余3组创基仅创缘充血;伤后10 d,除PBS组创基仍无明显血运外,其余3组均有微血管形成;伤后14 d,HGF-ADSC外泌体组创基血流信号强于其余3组且分布均匀。伤后10 d,HGF-ADSC外泌体组创基相对血流强度百分比明显高于PBS组、单纯HGF组及单纯ADSC外泌体组(q值分别为23.73、19.32、9.48,P值均<0.01);HGF-ADSC外泌体组创面中Ki67阳性细胞数及新生血管数均明显多于PBS组、单纯HGF组及单纯ADSC外泌体组(q值分别为19.58、18.20、11.04,20.68、13.79、8.12,P<0.01)。伤后10 d,HGF-ADSC外泌体组创面中eNOS蛋白表达水平明显高于PBS组、单纯HGF组及单纯ADSC外泌体组(q值分别为53.23、42.54、26.54,P值均<0.01);HGF-ADSC外泌体组创面中p-PI3K与PI3K的比值及p-Akt与Akt的比值均分别明显高于PBS组、单纯HGF组及单纯ADSC外泌体组(q值分别为16.11、11.78、6.08,65.54、31.63、37.86,P<0.01)。伤后14 d,HGF-ADSC外泌体组创面皮肤中组织缺损长度明显短于PBS组、单纯HGF组及单纯ADSC外泌体组(q值分别为20.51、18.50、11.99,P值均<0.01);HGF-ADSC外泌体组创面中CVF明显高于PBS组、单纯HGF组及单纯ADSC外泌体组(q值分别为31.31、28.52、12.35,P值均<0.01)。结论人HGF-ADSC外泌体可增加创基组织新生血管形成,从而显著促进糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合,其机制可能与HGF-ADSC外泌体通过激活PI3K/Akt信号通路从而促进创面中eNOS的表达增高有关。 | 曹涛 肖丹 计鹏 张智 蔡维霞 韩超 李雯 陶克 | 2022 | 中华烧伤与创面修复杂志2022，38，11： | 5 |
| 2 | 低氧预处理增强老年人骨髓间充质干细胞条件培养基对H9C2细胞氧化应激损伤的保护作用显示文摘背景:老年缺血性心脏损伤患者自体干细胞移植治疗效果欠佳,需要探索提高老年干细胞修复再生能力的有效途径。目的:探讨低氧预处理老年人骨髓间充质干细胞条件培养基对心肌的保护作用,为改善老年患者自体干细胞移植疗效提供实验支持。方法:将青年人骨髓间充质干细胞置于常氧培养箱培养,老年人骨髓间充质干细胞分别置于常氧和低氧培养箱培养,收集条件培养基分为青年常氧培养基组、老年常氧培养基组和老年低氧培养基组。H9C2细胞用3种条件培养基在常氧培养箱中培养24 h后,加入300μmol/L过氧化氢继续培养30 min诱导氧化应激,采用CCK-8法检测细胞活性,活性氧试剂盒检测活性氧水平反映氧化应激损伤程度,Western blot检测Bax、Bcl-2表达量反映细胞凋亡水平,Western blot检测p-AKT表达量反映AKT活化水平。另外,老年低氧培养基处理及过氧化氢诱导细胞氧化应激前,用含50μmol/L LY294002的DMEM培养液培养2 h,以阻断PI3K/AKT通路的激活,然后采用CCK-8法检测细胞活性。结果与结论:①与老年常氧培养基组比较,老年低氧培养基组H9C2细胞活力显著增加(P<0.01);凋亡相关蛋白Bax表达显著降低(P<0.05),凋亡抑制蛋白Bcl-2表达显著增高(P<0.05);活性氧水平显著降低(P<0.05);②与老年常氧培养基组比较,老年低氧培养基组H9C2细胞中p-AKT蛋白表达显著增高(P<0.05);③与老年低氧培养基组比较,应用LY294002抑制PI3K/AKT信号通路后,H9C2细胞活力下降(P<0.05);④结果提示,低氧预处理老年人骨髓间充质干细胞条件培养基通过AKT通路减弱H9C2细胞氧化应激损伤,减少细胞凋亡,提高细胞活性。 | 宋慧芳 谈佳音 康毅 李斌 毕志斐 龙女 夏仲年 郭蕊 | 2022 | 中国组织工程研究2022，26，1： | 4 |
| 3 | 糖尿病足溃疡创面愈合相关机制的研究进展显示文摘糖尿病是一种慢性代谢性疾病,严重危害全人类的身心健康。最新研究发现,2019年全球有4.63亿糖尿病患者,有超过400万人死因归于糖尿病,是全球第九大死因;预计到2045年全球约有近7亿糖尿病人口,而这大部分来源于发展中国家,我国占到世界第一^([1])。由于各种复杂的机制,糖尿病患者易出现外周神经病变和周围血管病变,继而发生感染导致无法愈合的糖尿病足溃疡^([2])(diabetic foot ulcer,DFU)。DFU是糖尿病常见且严重的并发症,治疗十分困难。传统的DFU治疗主要为控制血糖、改善循环、抗感染等对症支持治疗,不仅治疗费用大、疗效差,且致残、致死率高,给患者造成极差的生活体验,也给家庭、社会和国家造成沉重的负担,是国家医疗健康的一项重大挑战^([3])。因此,进一步研究DFU愈合机制,降低DFU的发生率、死亡率成为广大医务工作者的首要任务。国内学者研究发现^([4-6]),Nocth信号通路、PI3K-Akt-mTOR(磷脂酰肌醇4,5-二磷酸3-激酶、蛋白激酶B和哺乳动物雷帕霉素靶点共同构成)、NF-κB/NLRP3(核因子-kB、包含NACHT-LRR-PYD结构域的蛋白3)炎症小体等信号通路与糖尿病足溃疡愈合密切相关。现从以上几个通路分别阐述DFU愈合机制的研究进展,以期为临床治疗DFU提供理论依据。 | 韦积华 周海东 | 2021 | 右江医学2021，49，8： | 3 |
| 4 | 人羊膜上皮细胞的临床应用潜力的研究进展显示文摘人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)是位于胎盘羊膜靠近胎儿侧的上皮细胞,与其他胎盘来源的干细胞不同,hAECs源自胚胎上胚层,被认为是再生医学的理想种子细胞类型。研究显示,hAECs兼具胚胎干细胞样增殖分化潜力和成体干细胞样免疫调节特性。与其他类型的干细胞相比,hAECs在临床应用上具有特殊的优势,包括易于分离、细胞数量多、移植后无致瘤性和不涉及伦理问题等。在过去的二十年中,大量基础和临床前研究证明了hAECs具有治疗多种疾病的潜力。越来越多的证据表明,hAECs可通过不同的分子机制来修复甚至重建受损组织和器官的功能。本文详细综述了hAECs的主要生物学特征,总结了hAECs的研究现状,并讨论了基于hAECs的细胞疗法的临床应用前景。 | 姬静 杨莉 | 2022 | 生理学报2022，74，1： | 2 |
| 5 | 外泌体促进糖尿病溃疡创面愈合的meta分析显示文摘目的系统评价外泌体促进糖尿病溃疡创面愈合的效果。方法检索PubMed、EMbase、The Cochrane Library、知网、CBM、万方、维普等数据库,检索时间为建库至2021年2月。使用系统分析软件RevMan 5.3对纳入文献进行meta分析。结果最终纳入10篇随机对照研究(RCTs),纳入研究的实验动物样本量共207只。Meta分析结果显示,实验组在糖尿病溃疡创面愈合的第7天(SMD=8.33,95%CI:5.58~11.09,P<0.001)、第14天(SMD=3.97,95%CI:2.44~5.40,P<0.001)创面愈合率高于对照组;实验组在创面愈合过程中创伤部位新生血管密度(SMD=7.60,95%CI:4.96~10.24,P<0.001)、胶原纤维沉积百分比(SMD=6.98,95%CI:1.41~12.56,P=0.010)、再上皮化程度(SMD=16.81,95%CI:1.81~31.80,P=0.030)高于对照组,瘢痕形成低于对照组(SMD=-3.41,95%CI:-5.21~-1.60,P<0.001)。结论外泌体应用于糖尿病溃疡,可以促进创面新生血管产生、改善上皮化及胶原纤维沉积,明显促进创面愈合,并减少瘢痕形成。 | 苏欢 简华刚 | 2022 | 重庆医学2022，51，2： | 1 |
| 6 | 基于PI3K/AKT信号通路探讨益气化瘀法在糖尿病足溃疡中的应用显示文摘糖尿病足溃疡(DFU)是最常见的难愈性创面之一,愈合周期长,严重影响患者生活质量。PI3K/AKT信号通路为人体内重要的信号通路,通过对机体肌肉、皮肤等组织的调节参与细胞凋亡、氧化应激、血管新生等生物学功能,促进创面的愈合。该病的病机可以总结为因虚感邪,邪气致瘀,瘀阻伤正,化腐致损,虚和瘀贯穿其中。以益气化瘀法治疗DFU患者,临床上取得良好疗效。基于PI3K/AKT信号通路探讨益气化瘀法在DFU中的应用,为DFU的防治提供参考及依据。 | 陈仲件 杜娟娇 张力 王茜茜 郭夏晴 曹妍 | 2023 | 实用中医内科杂志2023，37，10： | 1 |
| 7 | 人脐静脉内皮细胞外泌体对糖尿病兔创面愈合的作用及其机制显示文摘目的探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)外泌体对糖尿病兔创面愈合的作用及其机制。方法采用实验研究方法。取中南大学湘雅三医院2019年6月收治的2例糖尿病溃疡患者(男49岁、女58岁)手术切除溃疡周边皮肤组织,提取原代血管内皮细胞(VEC)和人皮肤成纤维细胞(HSF),通过形态观察和流式细胞术成功鉴定。采用超速离心法提取HUVEC外泌体,通过形态观察、粒径检测和蛋白质印迹法检测成功鉴定。取20只3个月龄雌性新西兰兔,背部两侧分别制作1个2型糖尿病全层皮肤缺损创面,将创面分成外泌体组和磷酸盐缓冲液(PBS)组并进行相应处理,每组20个创面,观察创面组织完全覆盖时间。伤后14 d,行苏木精-伊红染色或Masson染色,观察血管生成或胶原纤维增生情况(样本数为20)。观察VEC和HSF与HUVEC外泌体共培养24 h对HUVEC外泌体的摄取情况。将VEC与HSF均分成采用HUVEC外泌体或PBS处理的外泌体组和PBS组,采用细胞计数试剂盒8检测培养4 d细胞增殖情况,采用划痕试验检测并计算划痕后24、48 h细胞迁移率,采用Transwell实验检测培养24 h细胞迁移数,采用实时荧光定量反转录PCR法检测核因子红细胞系2相关因子2(NRF2)、转录激活因子3(ATF3)的mRNA表达,行成管实验观测VEC培养12 h血管分支点数和成管长度(样本数均为3)。取VEC及HSF,分成同前处理的PBS组、外泌体组和采用相应基因干扰的NRF2干扰组、ATF3干扰组、空载干扰组,同前检测2种细胞增殖、迁移和VEC的血管形成(样本数均为3)。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析、独立样本t检验及LSD检验。结果外泌体组创面组织完全覆盖时间为(17.9±1.9)d,明显短于PBS组的(25.2±2.3)d,t=4.54,P<0.05。伤后14 d,PBS组创面血管密度明显低于外泌体组(t=10.12,P<0.01),胶原纤维生成少于外泌体组。培养24 h,HUVEC外泌体成功被VEC和HSF摄取。培养4 d,外泌体组HSF和VEC增殖活力均明显强于PBS组(t值分别为54.73、7.05,P<0.01)。划痕后24、48 h,外泌体组HSF迁移率(t值分别为3.42、11.87,P<0.05或P<0.01)和VEC迁移率(t值分别为21.42、5.49,P<0.05或P<0.01)均明显高于PBS组。培养24 h,外泌体组VEC、HSF迁移数均明显多于PBS组(t值分别为12.31、16.78,P<0.01)。培养12 h,外泌体组HSF和VEC中NRF2的mRNA表达均明显高于PBS组(t值分别为7.52、5.78,P<0.05或P<0.01),ATF3的mRNA表达均明显低于PBS组(t值分别为13.44、8.99,P<0.01)。培养12 h,外泌体组VEC血管分支点数明显多于PBS组(t=17.60,P<0.01),成管长度明显长于PBS组(t=77.30,P<0.01)。培养4 d,NRF2干扰组HSF和VEC增殖活力均较PBS组和外泌体组显著降低(P<0.05或P<0.01);ATF3干扰组HSF和VEC增殖活力均较PBS组显著增加(P<0.05或P<0.01),均较外泌体组显著降低(P<0.05或P<0.01)。划痕后24、48 h,ATF3干扰组HSF和VEC的迁移率均较PBS组显著增加(P<0.05或P<0.01),均较外泌体组显著降低(P<0.05或P<0.01)。划痕后24、48 h,NRF2干扰组HSF和VEC的迁移率均较PBS组和外泌体组显著降低(P<0.05或P<0.01)。培养24 h,ATF3干扰组VEC和HSF的迁移数均明显多于PBS组(P<0.05),均明显少于外泌体组(P<0.05或P<0.01);NRF2干扰组VEC和HSF的迁移数均明显少于PBS组和外泌体组(P<0.01)。培养12 h,NRF2干扰组VEC血管长度、分支点数均较PBS组和外泌体组明显减少(P<0.01);ATF3干扰组VEC血管长度、分支点数均较PBS组明显增加(P<0.01),均较外泌体组明显减少(P<0.01)。结论HUVEC外泌体通过促进VEC和HSF的增殖、迁移,从而促进糖尿病兔创面愈合,而NRF2和ATF3在这个过程中明显受到外泌体的影响,是外泌体作用的可能靶点。 | 易佳荣 李泽楠 谢慧清 陈舒悦 蒋碧梅 钱利 徐立新 李海红 雷少榕 陈志钊 周建大 | 2022 | 中华烧伤与创面修复杂志2022，38，11： | 1 |
| 8 | 微小RNA工程化外泌体在糖尿病创面中的作用研究进展显示文摘糖尿病创面是糖尿病患者常见的并发症之一,治疗较为困难。目前,糖尿病创面的治疗方法包括清创、功能性敷料覆盖、负压治疗、骨水泥填充、皮肤移植等。微小RNA(miRNA)工程化外泌体具有减轻炎症、刺激血管生成、促进胶原沉积和再上皮化等功能,在糖尿病创面修复中展现出巨大潜力,相关研究正在积极开展。该文对糖尿病创面的病理生理特征、miRNA与外泌体的特性、外泌体负载miRNA的工程化方法和miRNA工程化外泌体促进糖尿病创面愈合的机制进行综述,以期为miRNA工程化外泌体在糖尿病创面中的临床应用提供参考依据。 | 简喜超 邓呈亮 | 2024 | 中华烧伤与创面修复杂志2024，40，2： | 0 |
| 9 | 人羊膜上皮细胞通过抑制中性粒细胞胞外诱捕网促进糖尿病创面愈合显示文摘目的:糖尿病创面愈合延迟的特征是多细胞功能障碍及中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)的形成。既往研究表明人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)可通过调节成纤维细胞、巨噬细胞和血管内皮细胞促进糖尿病创面愈合。但hAECs对NETs是否有影响仍不得而知。本研究旨在阐明hAECs对NETs的影响。方法:体内:糖尿病大鼠模型通过链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导,在背部建立创面,用hAECs混悬液或PBS(Phosphate buffered saline)对创面进行干预后观察第5和第10天的愈合率,同时检测创面组织NETs相关的生物标志物。体外:提取人中性粒细胞,并用佛波醇(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)刺激,建立体外NETs模型。分别用24、48 h人羊膜上皮细胞的条件培养基(conditioned medium for human amniotic epithelial cells,CM-hAECs)干预中性粒细胞,观察其对NETs生成的作用。结果:在第5和第10天,hAECs细胞混悬液干预的创面愈合率均显著高于PBS干预的创面[(32.61±2.48)%vs.(20.80±2.70)%,P=0.028;(86.35±0.92)%vs.(61.52±3.70)%,P<0.001],且最佳浓度为5×10^(5)个/mL。hAECs细胞混悬液干预组创面组织中NETs相关蛋白组蛋白3(citrullinated histone,Cit-H_(3))和中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)的表达在第5天和第10天降低。体外研究表明,hAECs的条件培养基可抑制NETs的生成。结论:hAECs可能通过抑制NETs的生成促进糖尿病创面的愈合。 | 张春林 程庆丰 张莹宵 杜志鹏 胡金波 唐紫薇 | 2023 | 重庆医科大学学报2023，48，7： | 0 |
| 10 | Direct conversion of human fibroblasts into dopaminergic neuron-like cells using small molecules and protein factors显示文摘Background:Generation of neurons is essential in cell replacement therapy for neurodegenerative disorders like Parkinson’s disease.Several studies have reported the generation of dopaminergic(DA)neurons from mouse and human fibroblasts by ectopic expression of transcription factors,in which genetic manipulation is associated with potential risks.Methods:The small molecules and protein factors were selected based on their function to directly induce human fetal lung IMR-90 fibroblasts into DA neuron-like cells.Microscopical,immunocytochemical,and RT-qPCR analyses were used to characterize the morphology,phenotype,and gene expression features of the induced cells.The wholecell patch-clamp recordings were exploited to measure the electrophysiological properties.Results:Human IMR-90 fibroblasts were rapidly converted into DA neuron-like cells after the chemical induction using small molecules and protein factors,with a yield of approximately 95%positive TUJ1-positive cells.The induced DA neuron-like cells were immunopositive for pan-neuronal markers MAP2,NEUN,and Synapsin 1 and DA markers TH,DDC,DAT,and NURR1.The chemical induction process did not involve a neural progenitor/stem cell intermediate stage.The induced neurons could fire single action potentials,which reflected partially the electrophysiological properties of neurons.Conclusions:We developed a chemical cocktail of small molecules and protein factors to convert human fibroblasts into DA neuron-like cells without passing through a neural progenitor/stem cell intermediate stage.The induced DA neuron-like cells from human fibroblasts might provide a cellular source for cell-based therapy of Parkinson’s disease in the future. | Hua Qin An-Dong Zhao Meng-Li Sun Kui Ma Xiao-Bing Fu | 2021 | Military Medical Research2021，8，2： | 0 |
| 11 | 人羊膜上皮细胞移植对子宫瘢痕模型大鼠子宫内膜的影响及机制显示文摘目的 探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)移植对大鼠子宫瘢痕模型子宫内膜的改善及对基质金属蛋白酶8(MMP-8)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法 建立大鼠子宫瘢痕模型,并随机分为模型组及移植组,每组各18只,另取18只大鼠作为假手术组。移植组大鼠于子宫瘢痕处注射hAECs,模型组及假手术组仅给予等量PBS。4周后,各组取8只大鼠子宫组织,HE染色和Masson染色分别观察组织形态学变化和纤维化情况,测量子宫内膜厚度和腺体数量;细胞角蛋白和整合素β3免疫组化染色分别评估子宫内膜生长和容受性;RT-qPCR技术检测子宫内膜组织中MMP-8、VEGFA mRNA表达水平;Western blot法检测组织中MMP-8、VEGFA蛋白表达水平;8周后,取各组剩余10只大鼠进行妊娠能力测定。结果 模型组及移植组大鼠子宫内膜厚度、腺体数、角蛋白和整合素β3 IOD值、MMP-8、VEGFA mRNA和蛋白相对表达水平、妊娠率和子宫胚胎数低于假手术组(P<0.05);移植组大鼠子宫内膜厚度、腺体数、角蛋白和整合素β3 IOD值、MMP-8、VEGFA mRNA和蛋白相对表达水平、妊娠率和子宫胚胎数高于模型组(P<0.05),另外,hAECs移植可改善子宫瘢痕大鼠子宫内膜组织病理形态,减轻子宫内膜纤维化程度。结论 hAECs移植可改善子宫内膜损伤,减少瘢痕形成,提高子宫内膜容受性,并增强模型大鼠的妊娠功能,其作用机制可能与促进MMP-8和VEGFA表达有关。 | 王静 路成吉 臧建新 衣志爽 彭家晟 张峰 | 2023 | 中国比较医学杂志2023，33，12： | 0 |
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