| 2 | 携带人Kif4和EGFP基因慢病毒表达载体构建显示文摘目的:构建携带人Kruppel-like factor4(Kif4)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体pFUKGW。方法:Xho I线性化pLenti-EF1a-Kif4-IRES-EGFP,回收片段并补平XhoI酶切位点,接着BamH I酶切该片段,回收2.842kb片段而获连接用Kif4-IRES-EGFP;EcoR I线性化pFUGW,回收并补平EcoR I酶切位点,然后BamH I酶切该片段,回收9.174kb片段获连接用载体片段,最后使用DNA连接试剂盒中的Solution I将其与连接用Kif4-IRES-EGFP连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,提取质粒并行酶切鉴定。所构建载体命名为pFUKGW。获pFUKGW后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;将携带Kif4和EGFP基因的慢病毒感染人肿瘤细胞株CNE1、C666和SW620以建立相应病毒感染体系。结果:酶切证实成功构建了pFUKGW,按标准程序生产的携带Kif4和EGFP基因的慢病毒上清高效率感染CNE1、C666和SW620。结论:本实验成功构建携带人Kif4和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUKGW,为开展肿瘤细胞重编程研究打下了良好基础。 | 闫春江 李国炜 姚志芳 肖高芳 肖东 | 2011 | 微循环学杂志2011，21，2： | 1 |
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