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| 1 | 用多重PCR鉴别猪伪狂犬病野毒与疫苗毒的研究显示文摘根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与PRV的 gB、gD、gE基因序列互补的3对引物。对样品中的PRV DNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为549 bp(gB)、429 bp(gD)、366 bp(gE)。用这3对引物对三基因缺失疫苗毒的样品DNA模板进行多次多重 PCR扩增,均能稳定得到与设计相符合的2条特异性条带。敏感性试验结果表明,多重 PCR可以检测到 106 pg三基因缺失疫苗毒或756 pg PRV野毒的核酸模板量。特异性试验结果表明,以正常对照细胞及猪圆环病毒和猪细小病毒DNA为模板进行多重PCR扩增,均无任何条带。 | 刘丽娜 何启盖 陈焕春 刘正飞 张松林 汪招雄 | 2005 | 中国兽医科技2005，35，2： | 38 |
| 2 | 猪繁殖障碍病毒性疫病六重PCR检测方法的建立及应用显示文摘参照GenBank中相关的基因序列,设计了6对引物分别用于扩增PRV gE、PPV NS1、PCV ORF2、PRRSV ORF7、CSFVE2、JEVE基因的部分片段。敏感性和特异性试验结果表明,该mPCR对6种病毒的最低核酸检测量分别为PRV 6.6pg、PPV 96pg、PCV 12.9pg、PRRSV 10.5pg、CSFV 51pg、JEV 46pg,对猪流感病毒(SIV)、大肠杆菌(E.coli)的扩增结果均为阴性。103份临床病料检测结果表明,上述6种猪病毒性疫病在贵州省猪群中普遍存在且混合感染情况严重。该六重PCR方法不仅实现了上述6种病毒的同时检测,更实现了DNA病毒及RNA病毒的同步检测,能够对PRV、PPV、PCV、PRRSV、CSFV、JEV单个或混合感染的临床病料进行快速鉴别诊断。 | 刘志杰 曾智勇 汤德元 周莉 梁海英 肖超能 | 2012 | 畜牧兽医学报2012，43，9： | 30 |
| 3 | 应用多联PCR对引发猪繁殖障碍有关病毒的检测 Ⅰ.JEV、PPV、PRRSV、PRV多联PCR引物设计显示文摘首先在GinBank查出日本乙型脑炎病毒(JEV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与 呼吸系统综合征病毒(PRRSV)和猪细小病毒(PPV)基因组的所有已知序列,对各病毒基因区域进行同源性分析,结果各病毒基因组的结构特点,发现并确定了PRV的gH基因区、JEV的多聚蛋白基因区、PRRSV的结构蛋白区和PPV的VP2基因区为各自病毒保守序列。利用Goldkey软件对上述保守的特殊序列进行引物设计。 | 孙明 何旭玉 | 2000 | 中国兽医学报2000，20，1： | 24 |
| 4 | 多重PCR检测猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒的研究显示文摘根据GenBank上已发表的猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)的VP2基因序列和猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)的gH基因序列,设计合成了两对特异引物,分别建立了PPV和PRV的单项PCR诊断方法,通过对扩增条件的筛选,最终成功地建立了PPV和PRV的复合PCR诊断方法,即利用一次PCR反应,可同时扩增PPV的751bp和PRV355bp的特异性片段,而扩增猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)及相应的培养细胞(PK-15)核酸结果均为阴性,对PPV和PRV的最低检出量分别为100pg和10pg的DNA。该方法适合对PPV和PRV的联合检测和鉴别诊断。 | 李小康 赵丽 崔保安 陈红英 魏战勇 | 2007 | 中国预防兽医学报2007，29，3： | 22 |
| 5 | 闽西南地区部分规模化猪场猪伪狂犬野毒感染的血清流行病学调查显示文摘为了掌握闽西南地区规模化猪场猪伪狂犬野毒感染状况和流行趋势,应用ELISA方法对2012-2014年闽西南地区的859个规模化猪场22324份血清进行PR野毒感染血清学调查。调查结果显示被调查的猪场血清样品总阳性率为21.8%,场阳性率为57.0%;母猪、公猪、哺乳小猪、保育猪、育肥猪及后备猪的血清样品总阳性率分别为22.0%、23.7%、16.7%、15.6%、19.2%和27.2%,不同阶段的猪群PRVgE抗体阳性率差异显著(P<0.01)。2012年-2014年猪场阳性率分别为46.7%、45.4%和57.0%,血清样品阳性率分别为20.5%、18.4%和25.4%;血清样品阳性率在30%以上的猪场比例逐年上升,分别为14.8%、19.9%和32.2%;不同地区猪场PR野毒感染情况不同。结果表明近年闽西南规模化猪场猪伪狂犬病野毒感染压力依然很大,猪伪狂犬病的控制与净化形势严峻。 | 戴爱玲 范克伟 李晓华 赖立新 黄思琼 吴志伟 杨小燕 | 2016 | 安徽农业大学学报2016，43，1： | 16 |
| 6 | 云南省部分地区72家规模化猪场猪伪狂犬病净化效果分析显示文摘为了解2012-2015年云南地区72家规模化猪场执行猪伪狂犬病净化防控的效果,4年共净化种猪8 696头,检测样品16 854份,其中8 236份抗凝血及8 696份血清。用PCR、ELISA方法分别检测感染抗原和免疫抗体,结果显示:2012-2015年猪伪狂犬病免疫抗体阳性率分别为69.03%,81.86%,85.99%,86.40%;野毒感染率分别是24.42%,5.47%,2.78%,2.69%,其中种公猪感染率分别为18.25%,12.36%,8.33%,3.15%,种母猪的感染率分别为24.73%,4.80%,2.48%,2.65%。结果表明,经过4年净化,猪场猪伪狂犬的野毒感染率呈逐年降低趋势,其中14家野毒感染率0.00%,免疫抗体阳性率逐年升高,说明这72家规模化猪场执行的猪伪狂犬病净化方法具有实用性,猪场的猪伪狂犬净化取得了一定成效。 | 王钊哲 舒相华 杨亮宇 李永能 李文贵 尹革芬 李箐 杨赛伟 吴永新 宋春莲 | 2017 | 中国兽医学报2017，37，4： | 16 |
| 7 | 多重PCR/RT-PCR技术检测PRRSV、PPV、PRV和PCV-2显示文摘根椐GenBank中已发表的猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)等4种病毒基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PRRSV M和N、PPV VP2、PRVgD、PCV-2ORF2基因的保守区为各病毒的诊断靶序列。在建立各病毒单项PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了4种病毒的四重PCR技术,可同时扩增PRRSV的660 bp(北美株),PPV的313 bp,PRV的217 bp,PCV-2的447 bp的特异性片段。用82份临床病料对本研究多重PCR技术和单项PCR/RT-PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为93%以上。表明建立的多重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这4种病毒的同时检测和鉴别诊断。 | 王娟萍 姚敬明 高英杰 金扩世 丁馥香 周胜花 曹日亮 贺东昌 雷宇平 | 2009 | 中国兽医学报2009，29，3： | 15 |
| 8 | 应用多联PCR对引发猪繁殖障碍有关病毒的检测Ⅱ.JEV、PPV、PRRSV、PRV单项PCR检测方法的建立显示文摘在利用计算机设计出检测流行性乙型脑炎病毒 ( JEV)、猪细小病毒 ( PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV)、猪伪狂犬病病毒 ( PRV)的多联 PCR引物的基础上 ,分别进行各单项 PCR检测相应病毒试验 ,确定了各单项 PCR反应条件范围 ,并对各 PCR扩增产物进行了点杂交和部分测序鉴定。用单项 PCR对感染猪相关病毒的检测证实 ,本试验已经建立了有效、特异、敏感的检测 JEV、PPV、PRRSV、PRV的单项 PCR技术 ,为进一步建立多联 | 孙明 李红卫 高显明 涂长春 何旭玉 白晓鸿 金宁一 殷震 | 2001 | 中国兽医学报2001，21，1： | 15 |
| 9 | 猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒混合感染的检测分析显示文摘本研究采用RT-PCR方法对2010年12月至2011年11月采集于豫西地区的170份疑似PRRSV感染猪病料进行病原检测,得到102份高致病性PRRSV阳性样本,在此基础上应用PCR方法检测PCV2和PRV的感染情况,并计算混合感染率。试验结果显示,豫西地区PRRS发病猪主要疫病的总混合感染率为58.52%,二重混合感染率为39.21%,三重混合感染率为19.61%,其中PRRSV/PCV2型二重混合感染最严重,混合感染率达33.33%;春夏和秋冬总混合感染率分别为48.57%、81.25%,而且不管是二重还是三重混合感染,秋冬均比春夏更严重,尤其是PRRSV/PCV2/PRV型三重混合感染,秋冬与春夏季节的混合感染率相差较大,分别为37.50%、11.43%;PRRS发病猪从哺乳期到育肥期都有混合感染,混合感染率分别为42.10%、50.00%、100.00%,混合感染程度逐渐加重,主要集中在育肥期;不同发病时期的最高混合感染型也有所不同,其中哺乳期最高混合感染型为PRRSV/PCV2,混合感染率为42.10%,保育期最高混合感染型为PRRSV/PCV2、PRRSV/PCV2/PRV,混合感染率均为22.73%,育肥期最高混合感染型为PRRSV/PCV2/PRV,混合感染率为50.00%。本研究反映了豫西地区PRRS发病猪群与猪圆环2型及猪伪狂犬病的混合感染情况和规律,为该地区PRRS及其混合感染的临床诊治和区域性防控工作的进行提供了理论依据和指导。 | 王慧 宋宏晓 师丽刚 王伟杰 赵星灿 张明亮 马蓓蓓 崔淹鸽 张春杰 | 2012 | 中国畜牧兽医2012，39，9： | 15 |
| 10 | 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株与猪瘟病毒等混合感染的调查与分析显示文摘从华南地区PRRSV变异株(NSP2 1 594-1 680 bp缺失)核酸阳性的23个规模场、42个个体养殖场和15个散养户,随机采集发病、同群猪血清197份、组织样品115份,调查猪群个体感染PRRSV变异株情况,并对PRRSV变异株核酸阳性样品进行CSFV、PRV、PCV2、SIV检测,调查PRRSV变异株混合感染情况。结果表明:312份样品中224份PRRSV变异株核酸阳性,阳性率71.79%;PRRSV变异株核酸阳性样品中CSFV、PRV、PCV2核酸阳性样品分别为12份、2份、35份,阳性率分别为5.35%、0.89%、15.6%;80个场(群)均未检测到SIV核酸的存在。25个场(群)存在病毒混合感染,其中PRRSV变异株/CSFV、PRRSV变异株/PRV、PRRSV变异株/PCV2二重感染和PRRSV变异株/CSFV/PCV2、PRRSV变异株/PRV/PCV2三重感染猪场(群)百分率分别为5%、1.25%、21.25%和2.5%、1.25%。PRRSV变异株(NSP2 1 594-1 680变异)是造成猪场(群)重大损失的直接原因,并可与CSFV、PRV、PCV2等病毒出现混合感染,与PCV2混合感染比率较高。 | 王连想 马静云 谢青梅 陈峰 薛春宜 曹永长 毕英佐 于康震 | 2009 | 中国兽医杂志2009，45，10： | 14 |
| 11 | PCV2、PRV和PRRSV多重PCR方法的建立及其应用显示文摘根据GenBank登录的猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的参考基因序列,设计3对引物分别用于扩增PCV2的ORF2基因、PRV的gE基因、PRRSV的N基因的目的片段,通过优化反应中各个影响因素,建立了PRV、PCV2、PRRSV的多重PCR(mPCR)检测方法。敏感性和特异性的结果表明,该方法对这3种病毒的最低核酸检出量分别为32.5(PRV)、25.2(PCV2)、35.9pg(PRRSV)。该方法对猪流感病毒(SIV)、猪圆环病毒1型(PCV1)、大肠杆菌、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(TGE)等病毒的检测结果均为阴性。200份临床样品的多重PCR结果表明,PCV2感染率为80%(160/200),PRV感染率为21%(42/200),PRRSV的感染率为78%(156/200)。200份临床样品主要为PCV2和PRRSV混合感染,阳性率达56.0%(112/200)。该方法的建立对这3种病毒病的早期快速检测和指导临床实践具有十分重要的意义。 | 耿庆华 彭永刚 张波 裴程程 | 2014 | 中国兽医学报2014，34，9： | 14 |
| 12 | 猪病毒性腹泻三联疫苗的免疫研究显示文摘用猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)、猪流行性腹泻病毒 (PEDV)、猪轮状病毒 (PRV)制备的三联疫苗对 8头怀孕母猪进行免疫 ,所产 73头仔猪保护率 89%;对 110头仔猪进行口服免疫 ,2 1天用三种强毒混合毒攻击 ,免疫组保护 92 .7%,对照组发病 84.8%,经测定疫苗免疫期为 4个月 ,干燥阴凉条件下保存期为 12个月。田间受免仔猪 2 744头 ,免疫保护90 % | 牛小迎 叶成玉 张君 任晓凤 韩国华 | 2000 | 青海畜牧兽医杂志2000，30，3： | 13 |
| 13 | 三种PCR方法诊断猪伪狂犬病的比较研究显示文摘针对伪狂犬病毒gD基因的不同片段设计三对引物 ,分别进行PCR扩增用于猪伪狂犬病的诊断 ,扩增的三个片段的长度分别为 2 62bp、2 1 7pb以及 1 2 0 3bp的全基因。通过比较发现 ,这三种PCR诊断方法均具有很高的特异性和敏感性 ,但扩增gD基因内部 2 62bp的PCR诊断方法种具有突出优点 ,其退火与延伸合成一步 ,其操作可于 1h内完成 ,敏感性更高 ,更适于猪伪狂犬病的快速诊断。 | 范伟兴 刘文强 胡敬东 赵宏坤 | 2003 | 中国预防兽医学报2003，25，4： | 12 |
| 14 | PRVLA株gD基因的序列测定及其重复高变区的发现显示文摘对猪伪狂犬病病毒鲁 A株 (PRV L A株 ) g D基因进行了克隆和序列测定 ,结果表明 :在测序的 14 5 3bp的 DNA序列中包括着 1个 12 0 3bp的 ORF(即 g D基因 ) ,它编码 4 0 0个氨基酸组成的多肽 ;在整个 g D基因的 ORF内 PRVL A株与 PRV Ea株、Hubei株、Rice株、NIA- 3株、Kaplan株的 g D基因比较 ,核苷酸的同源性分别为 98.3%、98.3%、98.0 %、98.1%、98.6 % ,氨基酸的同源性分别为 97.8%、97.8%、97.5 %、98.1%、98.6 % ;发现 PRV L A株 g D基因与Ea株、Hubei株、Rice株、NIA- 3株、Kaplan株的 g D基因均在 80 2~ 837nt处有 1个 C(A) GGCCC的重复高变区 ,其对应的是 g D2 6 7~ 2 79位氨基酸残基 Arg- Pro的重复高变区。正是该重复高变区的碱基缺失或插入使得 PRV g D的ORF在 1194~ 12 15 nt间变化 ,g D前体的氨基酸残基为 398~ 4 0 4个。 | 范伟兴 魏荣 张雪莲 陈溥言 赵宏坤 | 2003 | 中国兽医学报2003，23，4： | 10 |
| 15 | Detection of Pseudorabies Virus Antibodies in Human Encephalitis Cases显示文摘Pseudorabies virus(PRV),a veterinary pathogen that infects domestic animals as well as wild animals such as wild boar and feral swine,was recently reported to infect human and led to endophthalmitis and encephalitis.A retrospective seroepidemiologic survey was conducted using 1,335 serum samples collected from patients with encephalitis and ELISA positive rates were 12.16%,14.25%,and 6.52%in 2012,2013,and 2017,respectively. | LI Xiang Dong FU Shi Hong CHEN Ling Yan LI Fan DENG Jun Hua LU Xuan Cheng WANG Huan Yu TIAN Ke Gong | 2020 | Biomedical and Environmental Sciences2020，33，6： | 9 |
| 16 | 豫南地区规模化猪场仔猪腹泻病毒性病原感染情况调查显示文摘利用PCR和RT-PCR方法对豫南地区发生仔猪腹泻的218个猪场进行病原体检测,以调查猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的感染情况。结果显示:该地区引起仔猪腹泻主要病原体是PEDV(为94.5%),其次为PCV2和PRV,分别为72.1%和33.9%,CSFV和TGEV仅为5.5%和6.0%;100~500头母猪规模场发生仔猪腹泻最为严重(126个),其次是500~1 000头母猪规模场(58个);混合感染非常普遍,二重混合感染最为严重,高达70.6%,其中100~500头母猪规模场感染率最高(76.2%),PEDV+PCV2混合感染最为严重(101个场),三重混合感染为21.1%,其中100头以下母猪规模场最高,为27.0%,PEDV+PCV2+PRV混合感染最为严重(40个)。 | 郭晓秋 曲哲会 陈宏智 刘涛 易本驰 | 2015 | 畜牧与兽医2015，47，7： | 9 |
| 17 | 猪呼吸和繁殖障碍类病毒性疫病多重PCR检测方法的建立及应用显示文摘根据GenBank中PRRSV ORF6、PCV2 ORF2、PPV NS1、PRV gB、SIV M、JEV NS1、CSFV E2等基因的部分片段,分别设计特异性引物,用实验室已保存的病毒及阳性病料,通过对7个病毒单一PCR的退火温度和敏感性进行优化和检测,再选择合适的多重PCR缓冲体系及酶,优化退火温度、模板及引物浓度,最后检测多重PCR的敏感性、特异性及重复性,建立一种能够同时且快速鉴别PRRSV、PCV2、PPV、PRV、SIV、JEV和CSFV这7种常见猪呼吸道和繁殖障碍类病毒的多重PCR检测方法,并用其对2017-2019年贵州部分地区的150份临床病料进行检测。多重PCR特异性检测结果表明:从混合病毒基因组中分别扩增出大小为224,353,424,549,684,831,1 137 bp的特异性片段,未扩增出E.coli、APP、PEDV及正常组织的DNA/RNA;敏感性试验表明,该方法对病毒的最低检测量分别为PRRSV 94 pg、PCV2 66 pg、PPV 68 pg、PRV 20 pg、SIV 35 pg、JEV 17 pg、CSFV 14 pg;重复性试验表明:相同条件下的6次重复试验均能扩增出7个病毒的目的条带;应用试验表明:150份临床病料中二重感染阳性率高达66.00%(99/150);三重感染阳性率达11.33%(17/150);四重感染阳性率达2.00%(3/150);五重感染阳性率达0.67%(1/150);六重感染阳性率为0,七重感染阳性率为0,阳性PRRSV、PCV2、PPV、JEV、SIV的多重PCR与单一PCR的符合率均为100.00%,阳性CSFV和PRV的符合率为90.00%以上,研究建立的多重PCR检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,对猪场猪呼吸和繁殖障碍类病毒病混合感染的快速诊断具有十分重要的意义。 | 张森 石远菊 汤德元 王彬 郭倩妤 廖少山 杨志刚 | 2020 | 中国兽医学报2020，40，1： | 9 |
| 18 | 多重PCR检测PRV、PPV、PCV方法的建立及其应用显示文摘根据GenBank上已发表的猪伪狂犬病病毒(PRV)的gE、gI基因序列、猪细小病毒(PPV)的E蛋白的基因序列、II型猪圆环病毒(PCV-2)的ORF2基因序列,分别设计并合成3对能特异性扩增PRV、PPV、PCV-2的引物,通过DNAstar软件分析这3对引物不存在cross d im er。建立了PCR方法分别检测PRV、PPV、PCV-2,然后通过条件的优化,建立了PCR同时检测PRV、PPV、PCV-2的方法并研制出试剂盒。对试剂盒的特异性和有效期进行了研究。结果表明,该试剂盒具有很好的特异性,有效期在-20℃至少可以保存1年。 | 姜焱 周斌 张常印 | 2005 | 微生物学通报2005，32，6： | 8 |
| 19 | 表达猪细小病毒VP2蛋白的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株的生物学特性显示文摘探索重组PPV VP2基因的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株作为弱毒疫苗候选株的潜在价值,对其在多种细胞上的增殖特性、病毒滴度、最适培养细胞中的遗传稳定性、一步生长曲线、转录和翻译水平等生物学特性进行研究,并初步探索对小鼠安全性。结果显示:重组病毒rPRV-VP2株在VERO、ST、PK-15和IPEC细胞上的TCID50分别为104.375/0.1mL、106.5/0.1mL、103.75/0.1mL、105.625/0.1mL。重组毒与亲本毒PRV HB-98株在ST细胞中的毒力(106.125 TCID50/0.1mL)和细胞病变相当,重组病毒保持了PRV病毒的通性。连续传毒20代后的绿色荧光观察、RTPCR、Western blot试验结果均表明重组病毒中的VP2基因得到了有效表达,且遗传稳定性良好。安全性试验结果显示:重组毒对小鼠安全。本试验为后期对PPV VP2基因重组猪伪狂犬病毒rPRV-VP2株的开发利用奠定了基础。 | 付朋飞 乔涵 张宇 杨兴武 徐朋丽 陈红英 | 2017 | 中国兽医学报2017，37，1： | 8 |
| 20 | 贵州省猪伪狂犬病的分子流行病学调查及变异分析显示文摘为了解贵州省猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的分子流行病学状况,本试验对贵州省16个规模化猪场2016-2017年间采集的1430份血液样品进行PRV gE/gB抗体ELISA和PCR检测,并对PCR检测呈阳性的部分样品进行gE基因的克隆、测序及分析。结果表明,共检出PRV gE抗体阳性样品27份,其中PRV在保育猪中的gB抗体阳性率为90.35%,相对保护力较为薄弱,野毒检出率最高;克隆测序得到的4株PRV gE基因序列中,株间核苷酸同源性为99.6%~99.9%,氨基酸同源性为99.1%~99.8%;遗传进化树分析得出检测毒株与GenBank上已公布的变异毒株序列同属一个较大而独立的分支。试验为了解和研究PRV贵州流行株的分子流行状况及变异特征提供一定的理论依据。 | 胡玲玲 汤德元 曾智勇 王彬 黄涛 龙冬梅 石远菊 杨伟 叶丽 郭倩妤 廖少山 刘巧玲 | 2019 | 中国兽医学报2019，39，8： | 8 |
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