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| 1 | 荧光定量PCR方法检测畜肉食品中猪源性成分显示文摘目的建立一种快速、特异、灵敏的猪源性成分检测方法。方法本研究以猪线粒体12S rRNA基因序列为靶位点设计引物和探针,进行荧光定量PCR扩增,建立猪源性成分检测方法;以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、鸭肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测;以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对猪肉DNA进行梯度稀释,做灵敏度检测。结果该方法能够有效对猪源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高(可达0.1μg/kg)并且羊肉成分的存在对猪肉灵敏度检测没有影响。结论该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测畜肉食品中含有的猪源性成分。 | 王颖 史艳宇 刘金华 吕航 王莹 | 2013 | 食品安全质量检测学报2013，4，5： | 19 |
| 2 | 刺五加鲨烯合酶基因家族两成员的表达及其与皂苷含量的关系显示文摘为了探明刺五加鲨烯合酶(SS)基因家族2成员对皂苷含量的作用机制,以actin为内参基因,利用real time PCR技术,分析刺五加不同生长发育时期、不同器官及茉莉酸甲酯(MeJA)处理对SS1、SS2基因表达及皂苷含量的影响。结果表明:刺五加SS基因家族的SS1和SS2在整个生长期和各器官中均有表达,且表达量差异显著(P<0.05),其中,在萌芽期两者的表达量差异最大。SS1在叶片、叶柄和根器官中的表达量显著高于SS2的表达量(P<0.05)。MeJA处理可显著提高SS1和SS2基因的表达量。刺五加SS1的表达量与皂苷含量间的相关系数低,未达显著水平。SS2的表达量与皂苷含量呈显著的正相关关系(P<0.01)。SS2表达量的高低决定了皂苷含量的高低,是刺五加中三萜皂苷生物合成中的关键酶。 | 邢朝斌 龙月红 李非非 周秘 修乐山 劳凤云 | 2014 | 西南农业学报2014，27，3： | 15 |
| 3 | 荧光定量PCR方法检测畜肉食品中鸭源性成分显示文摘目的建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法本研究以鸭线粒体基因全序列为靶位点设计引物和探针,进行荧光定量PCR扩增,建立鸭源性成分检测方法;以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测;以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对鸭肉DNA进行梯度稀释,做灵敏度检测。结果该方法能够有效对鸭源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高(可达0.1μg/kg)并且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响。结论该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测畜肉食品中含有的鸭源性成分。 | 史艳宇 刘金华 吴月丹 王莹 王颖 王潇 刘晓晖 周亮 赵立群 | 2013 | 食品安全质量检测学报2013，4，6： | 10 |
| 4 | 野生大豆P5CS基因的克隆及对盐胁迫反应显示文摘逆境下植物大量积累脯氨酸是减轻胁迫伤害的一种自我保护机制。本研究应用同源克隆方法从NaCl处理的野生大豆中克隆获得一个脯氨酸合成酶(P5CS)基因,命名为GsP5CS。该基因核苷酸序列全长2.232 kb,含一个2148bp开放阅读框,编码715个氨基酸,包含有高等植物P5CS蛋白质的5个主要功能域,与菜豆PvP5CS1基因核苷酸序列相似性高达98.79%。Real Time PCR分析显示该基因受轻度盐胁迫诱导上调表达,根中表达高峰出现在200 mmol/L NaCl处理下,相对表达量为对照的5.83倍;叶片中表达高峰出现在300 mmol/L NaCl处理条件下,相对表达量为对照的12.78倍。并且该基因在根和叶片中的表达模式和脯氨酸含量的变化模式相同。上述结果说明,GsP5CS可能参与野生大豆脯氨酸合成。 | 张兆元 陈吉宝 宋佳璘 曹苑楠 冉小芹 党虹 | 2014 | 植物遗传资源学报2014，15，4： | 10 |
| 5 | 中国美利奴绵羊肉用品系生长轴相关基因表达对其十二指肠发育的影响显示文摘本文旨在探讨生长轴基因与羔羊十二指肠生长发育的关系。分别于0、7、14、30、60和90日龄随机选取健康的中国美利奴绵羊(新疆军垦型)肉用品系雌、雄各3只,测定体质量后屠宰,迅速采集其脑垂体、肝脏和十二指肠等组织样品,并测量十二指肠长度。用荧光实时定量PCR法分别测定脑垂体中生长激素(GH)和生长激素释放激素受体(GHRHR),肝脏和十二指肠中生长激素受体(GHR)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)基因表达的发育性变化,并进行了性别间比较。结果表明,羔羊肝脏中GHR基因和十二指肠中GHR、IGF-1基因表达mRNA丰度的变化模式与垂体中GH和GHRHR基因表达mRNA丰度的变化发育模式相似,呈先升高后逐渐下降的趋势,但这种趋势有一定的时差性;十二指肠的日增长发育性变化模式与肝脏中IGF-1基因表达的变化模式相似。结果提示,十二指肠的发育性变化主要受到肝脏中产生的IGF-1内分泌作用的调控,同时也可能受到脑垂体中GH内分泌的直接作用。 | 周其伟 白春生 贾斌 蒋文生 蒋松 杜迎春 李仁燕 温青娜 吕利民 | 2010 | 畜牧兽医学报2010，41，8： | 8 |
| 6 | 上海市奉贤区2010年流感监测情况分析显示文摘目的:了解上海奉贤区2010年流感流行的特点,为本地区流感预防控制工作提供科学依据。方法:采用Realtime PCR方法对哨点医院采集的流感样病例进行流感核酸检测。结果:2010年共检测流感样鼻咽拭子标本711份,流感病毒核酸阳性131份,阳性检出率为18.42%。其中检出季节性H11份,占0.14%;季节性H315份,占2.11%;B型流感98份,占13.78%,新甲型H1N117份,占2.39%。1月-3月检出率最高为34.23%,5岁~9岁年龄组阳性率最高,占34.35%。结论:监测显示2010年上海市奉贤区流感主要流行株为B型,流感流行呈冬春季高发的特点,5岁~9岁年龄组为高发人群。 | 谢晓红 陶力新 王仁刚 沈莉 | 2012 | 中国卫生检验杂志2012，22，2： | 8 |
| 7 | 甘草HMGR,SQS1,β-AS合酶基因CNVs检测体系的建立显示文摘目的:建立可用于甘草HMGR,SQS1,β-AS合酶基因CNVs测定的稳定可靠的检测体系。方法:利用Real timePCR方法对甘草HMGR,SQS1,β-AS合酶基因CNVs进行测定。结果:在HMGR,SQS1,β-AS合酶基因以及内标基因lectin的定量检测实验中,其定量反应的Ct值分别在25.82~25.88,29.01~29.08,15.52~15.56,19.06~19.08变化,SD分别是0.033,0.032,0.024,0.011,其CV分别是0.12%,0.22%,0.16%,0.06%。结论:所建立的Real time PCR体系重复性好,检测系统工作稳定可靠,可用于甘草HMGR,SQS1,β-AS基因的CNVs筛选。 | 刘颖 刘东吉 刘春生 | 2012 | 中国中药杂志2012，37，3： | 7 |
| 8 | 斜带石斑鱼TLR5S基因结构及功能分析显示文摘Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)属于先天免疫系统中的一种模式识别受体(PRR),可分为可溶型和跨膜型2种.它可以识别病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP),从而启动信号转导.本研究从NCBI数据库中得到斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)可溶型TLR5(ECTLR5S)cDNA全长序列(Genbank登录号:GQ396667).其cDNA序列全长2 439bp,包括69bp的5′UTR,435bp的3′UTR和1 935bp的开放阅读框,共编码644个氨基酸,预测编码蛋白质分子质量为72.28ku,等电点为6.37.将ECTLR5S基因氨基酸序列与其他脊椎动物的TLR5S基因氨基酸序列进行比对,结果显示出很高的相似性,其中与牙鲆相似度可达69%.Real time PCR检测结果显示ECTLR5S基因在斜带石斑鱼不同器官中均有表达,其中在肝脏中的表达量最高,其次是脾脏、血淋巴、肾脏等.Realtime PCR检测ECTLR5S基因在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染3,6,12,24,48h后的肝脏中表达情况,结果显示ECTLR5S基因在3,6,12,24h时表达量显著上调(p<0.05),而在48h下降至初始水平.这些结果说明ECTLR5S基因可能参与到斜带石斑鱼抗弧菌感染的免疫反应中,并且肝脏是其发挥作用的重要器官. | 林克冰 葛辉 林琪 吴建绍 何丽斌 方琼珊 周宸 | 2013 | 厦门大学学报(自然科学版)2013，52，1： | 7 |
| 9 | 动物源性食品中猪源性成分检测显示文摘为探讨猪源性成分检测可行的方法,利用SYBR Green Ⅰ Real time PCR对动物源性食品中猪源性成分进行测定。根据猪mtDNA保守序列设计特异性引物,对牛、羊、猪的动物源性食品进行扩增;克隆目的基因片段,并以此为标准品,优化反应条件和反应体系,提高灵敏度;反复检测不同样品,测试稳定性。结果表明SYBR GreenⅠReal time PCR技术能够特异性的检测到动物源性食品中猪源性成分,引物特异性强、稳定性可靠,灵敏度达到1×10^(-6)ng/μL,建立了动物源性食品中猪源性成分的快速、精准、经济、便捷的检测方法。 | 陈正芳 曾萍 杨具田 臧荣鑫 曹忻 徐红伟 | 2015 | 中国农学通报2015，31，36： | 6 |
| 10 | 丹参变应原基因(Sam a1)的克隆及其原核表达显示文摘Ⅰ型变态反应是小分子植物蛋白结合IgE抗体引起的一种疾病。本文首次从丹参中克隆出变应原蛋白基因,命名为:Sam a1(GenBank注册号:EU122383)。Sama1包含483bp的开放读码框,编码160个氨基酸残基。其推导氨基酸(命名为:Sama1)具有Bet v1结构域,属于病原菌相关的Bet v1蛋白家族,与苹果中变应原mal d1类似蛋白同源性高达66%。三级结构预测模型显示Sam a1含有T细胞主要抗原决定簇的c端仅螺旋。实时定量PCR结果显示:黄瓜细菌性角斑病茵和NaCl溶液诱导下Sam a1的表达呈现上调趋势,表明Sam a1可能与病程相关蛋白和盐胁迫相关。Sam a1转入大肠杆菌M15后,表达出与预测蛋白大小相当的目标蛋白,IPTG诱导后5~7h目标蛋白可大量表达。本研究为从植物分子机制上了解中药变态反应作用机制奠定了基础,尤其对中药产业的发展具有重要的意义。 | 化文平 王喆之 | 2008 | 植物研究2008，28，5： | 6 |
| 11 | 应用SYBR Green Real Time PCR技术检测细胞培养物中支原体污染显示文摘根据常见支原体23S rRNA的保守区域基因序列,设计通用引物,应用SYBR Green Real Time PCR技术,研究建立了细胞培养物中支原体污染的快速检测方法。该方法能检测到污染细胞培养物的6种常见的支原体,敏感度达4.2×10-2pg/mL模式株的DNA。 | 丁敏 张瑞婷 毛开荣 朱鸿飞 | 2009 | 畜牧与兽医2009，41，1： | 6 |
| 12 | Real Time PCR研究进展及其在海洋病原生物检测中的应用显示文摘Real Time PCR,即实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法,目前已广泛应用于分子生物学研究的各个领域。Real Time PCR技术秉承及发展了普通PCR的快速、高灵敏度检出等优点,同时克服了普通PCR不能准确定量、容易污染等缺点,无需在反应结束后通过电泳操作确认扩增产物。目前,Real Time PCR可设计多对引物在同一反应体系中同时对多个靶基因进行扩增,实现多重实时定量检测。Real Time PCR使PCR技术发生了质的飞跃,扩展了PCR技术的应用范畴,是一种具有划时代意义的技术。本文主要介绍Real Time PCR的主要原理、解析方法、技术发展趋势及其在海洋病原生物检测方面的应用。 | 张振冬 邹亚男 王淑芬 梁玉波 | 2008 | 海洋环境科学2008，27，A02： | 6 |
| 13 | 高原鼠兔ob基因的组织表达特征显示文摘ob基因编码的leptin蛋白在调节生物体能量平衡中起到重要作用。本研究应用Taqman探针real time PCR技术对高原鼠兔ob基因的组织分布进行检测。通过提取不同组织总RNA,经DNase I消化后,用随机引物进行反转录合成cDNA,采用特异性Taqman探针和引物分别对ob基因及β-actin基因进行实时定量PCR扩增,对不同组织中ob基因和β-actin基因的初始拷贝数之比进行比较。结果表明ob基因在脑、心脏、肺、肝脏、脾脏、肾脏、骨骼肌、脂肪组织中均有表达,其中以白色脂肪组织中ob基因表达量最高,其次为心脏和肺,表达量最低的是肝脏和肾脏。 | 杨洁 赵新全 郭松长 李红阁 祁得林 王德鹏 曹俊虎 | 2007 | 兽类学报2007，27，1： | 5 |
| 14 | 转基因番茄植株Mi1.2表达水平的Real Time PCR检测体系的建立显示文摘[目的]为转基因番茄植株的高通量筛选奠定基础。[方法]利用CTAB法提取番茄叶片总RNA进行Real Time PCR扩增,分析转MI1、2基因的番茄植株表达水平的检测体系。[结果]提取RNA的A260/A280为1.78~1.88,RNA无明显降解。在严谨扩增条件下,引物SYBR2的扩增效率高于SYBR1。Mg^2+的适宜浓度为2.0mg/L。Real Time PCR扩增产物具有良好的特异性,熔解曲线特异峰出现在84.5℃附近,在熔解曲线略低于83℃附近有极微弱的非特异峰。因此在定量反应中信号检测步骤应放在84℃。以4种不同模板分子数条件下扩增曲线Ct值得到的回归方程为Y=-3.78×log(copynumber)+39.50,相关系数为0.998。[结论]该试验获得的Real Time PCR体系可用于转基因植株表达水平的检测。 | 魏振林 田志环 焦传珍 董玲 | 2008 | 安徽农业科学2008，36，18： | 3 |
| 15 | 大蒜新素降低鼠巨细胞病毒播散性感染小鼠病毒DNA载量研究显示文摘目的用大蒜新素治疗鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)播散性感染小鼠至慢性期,检测小鼠唾液腺、肝、脾和肾组织内MCMV DNA载量动态变化,在整体水平上观察大蒜新素抗MCMV的长期疗效。方法BALB/c幼鼠60只,腹腔接种MCMVSmith株建立MCMV播散性感染模型,随机分为大蒜新素治疗组和模拟治疗组各30只,接种病毒后24 h,两组分别腹腔注射大蒜新素25 mg.kg-1.d-1和0.9%氯化钠注射液0.2 mL,qd,共120 d。于治疗后1,3,7,14,28,45,60,75,90和120 d,每组随机选择小鼠3只,取唾液腺、肝、脾和肾组织,采用real time PCR法检测组织内MCMV DNA载量。结果模拟治疗组小鼠唾液腺内MCMV DNA载量最高,在治疗后14 d(感染后15 d)达高峰;肝、脾和肾内病毒DNA载量治疗后7 d达峰值;治疗28 d(感染29 d)后,各组织内病毒DNA载量明显减少,尤其是肝、脾和肾组织病毒DNA呈持续低水平(进入慢性期)。与模拟治疗组比较,大蒜新素治疗组治疗后7,14和28 d唾液腺、脾和肾内MCMVDNA载量显著降低;治疗后7和14 d肝内病毒DNA载量明显降低。进入慢性期后,两组小鼠各脏器病毒DNA载量差异无显著性。结论大蒜新素长期治疗不能完全清除CMV,但在急性感染期(病毒增殖高峰期)能显著降低脏器内病毒DNA载量。 | 刘兴楼 舒赛男 罗丹 李亚男 王慧 田佳 方峰 | 2010 | 医药导报2010，29，5： | 3 |
| 16 | Diagnosis of Toxoplasma gondii infection in pregnant women using automated chemiluminescence and quantitative real time PCR显示文摘Objective: To identify serodiagnosis and quantification of Toxoplasma gondii(T. gondii) infection among pregnant women in Salmas, northwest of Iran. Methods: In this crosssectional study, 276 blood samples were collected from pregnant women referred to the health care centers in Salmas city. The demographic variables were also recorded. Titers of antiToxoplasma IgM and IgG antibodies(Ab) were determined using the chemiluminescence immunoassay. Quantitative real-time PCR targeting the T. gondii repeated element gene was also performed on the blood sample. Results: Out of all, 19.92%(55/276) and 2.17%(6/276) patients were seropositive for anti-Toxoplasma IgG and IgM Ab, respectively. Moreover, the presence of T. gondii DNA was observed in 12.31%(34/276) blood samples. A significant relationship was observed between the IgG Ab seropositivity and contact with the cat as a risk factor(P=0.022). Conclusions: The seroprevalence rate of T. gondii infection in pregnant women is relatively low. Consequently, the seronegative pregnant women are at risk, and a considerable rate of positive blood samples for the presence of parasite's DNA should not be ignored. Besides, quantitative real-time PCR could be considered as an accurate method for diagnosis of acute toxoplasmosis especially when the precise results are of the most importance in pregnancy. Limiting contact with cats is also suggested for pregnant women. | Ehsan Ahmadpour Elmira Zargami Mahmoud Mahami-Oskouei Adel Spotin Abbas Shahbazi Hossein Samadi Kafil Saba Rajabi Paria Alizadeh Yagoob Azadi Reza Bahaj Firouz Shahrivar Aleksandra Barac | 2019 | Asian Pacific Journal of Tropical Medicine2019，12，1： | 3 |
| 17 | 武威市2011-2014年流感病原学监测分析显示文摘目的通过对武威市2011-2014年流感病原学监测分析,了解武威市流感疫情动态、规律、分布及趋势,及时发现流感病毒新型病毒株及其抗原变异程度,为制定防治策略提供科学依据。方法对2011-2014年武威市人民医院门诊病历2 033例疑似流感患者无菌采集咽拭子,冷链运输并采用Real time PCR法检测流感病毒A型(Flu A)、流感病毒B型(Flu B),并对阳性样进行分型。结果 Real time PCR法检出流感阳性351份(17.26%),包括170份Flu B(8.36%)、107份季节性H3(5.26%)、72份H1N1(3.54%)和2份季节性H1(0.10%)。2012年阳性率最高为28.41%,其次为2013年(19.07%)和2014年(15.04%),2011年阳性率最低(6.00%),差异有统计学意义(χ~2=77.26,P<0.05)。男性患者的流感病毒检出率较女性患者低(χ~2=136.61,P<0.05)。3~岁组阳性率为21.77%,明显高于其他年龄组(χ~2=764.06,P<0.05)。结论武威地区2011-2014年流行性感冒主要由Flu B引起,其流行有明显的季节特征和人群特征,防控重点应以群聚人群为主,采取综合防控措施,控制疫情蔓延。 | 房小梅 常全娥 黄爱霞 银菊香 | 2017 | 中国公共卫生管理2017，33，3： | 2 |
| 18 | 小麦醇溶-谷蛋白盒结合因子基因表达特性的研究显示文摘为了给小麦品质改良的基因工程研究提供参考依据,以小麦醇溶-谷蛋白盒结合因子(Wheat Prola-min-Box Binding Factor,WPBF)基因为研究对象,从定性和定量两个方面,利用RT-PCR与Real Time PCR系统地研究了WPBF基因在小麦不同组织器官中以及在小麦胚乳整个发育过程中表达的时空特异性。结果表明,WPBF基因的表达是胚乳特异性的,表达跨胚乳的整个发育过程,在其表达的高峰阶段,表达强度为参照基因β-Actin的43%。 | 牛静勇 陈占宽 贺浩华 | 2009 | 麦类作物学报2009，29，6： | 2 |
| 19 | Detection of infectious dengue virus by selective real-time quantitative polymerase chain reaction显示文摘Dear Editor,The dengue virus(DENV)is a single-stranded positivesense RNA virus that belongs to the family Flaviviridae(Gubler,2002),and has four serotypes,DENV1–DENV4,which are transmitted via Aedes aegypti and Aedes albopictus(Rodriguez-Roche and Gould,2013).It has been reported that more than 50 million dengue infections occur each year(Guzman et al.,2010),and a serious outbreak occurred in the Southern Provinces | Xin Huang Xuan Zhou Xiaoyan He Pei Wang Shuai Yue Lixin Wu Yu Zhang Qian Xie Bao Zhang Wei Zhao | 2016 | Virologica Sinica2016，31，4： | 2 |
| 20 | 西藏青稞抗旱相关基因表达模式分析研究显示文摘从青稞苗期叶片干旱胁迫诱导基因表达的正向差减文库中筛选出丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因(AAPK)、胁迫诱导蛋白基因(Tsi1)、脱水蛋白基因(Dehydrin)、Δ1-二氢吡咯-5-羧酸合成酶基因(P5Cs)等9个与抗旱相关的基因,采用实时荧光定量PCR对其表达模式进行分析。结果表明,在渍水条件下,Tsi1、ERA1、Os SKIPa、Nt-SYR1、SHMT和AAPK基因上调表达,而P5Cs、Dehydrin基因下调表达;随着干旱胁迫处理时,Tsi1、ERA1、Os SKIPa和AAPK基因也呈上调表达,干旱复水后8 h时,这些基因表达量均达到最高。Nt-SYR1干旱胁迫后,在土壤绝对含水量达到4.8%明显上调表达,复水后2 h时表达量最高;P5CSs基因,在严重干旱胁迫下呈下调表达,在干旱后复水后表达量逐步上调表达;Dehydrin基因在干旱胁迫处理时上调表达,随着复水时间增加,也呈上调表达;SHMT基因在干旱处理里及复水后均而呈下调表达;SAMDC基因在渍水及正常生长所需的土壤绝对含水量时表达无变化,干旱处理时呈下调表达,但土壤绝对含水量达到4.8%明显上调表达,之后又呈下调表达,整个处理时期表达量较低。 | 原红军 | 2015 | 现代农业科技2015，，3： | 2 |
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