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| 1 | Neuroprotective effect of Notch pathway inhibitor DAPT against focal cerebral ischemia/reperfusion 3 hours before model establishment显示文摘As an inhibitor of the Notch signaling pathway, N-[N-(3,5-difluorohenacetyl)-l-alanyl]-S-phenylglycine tert-butyl ester(DAPT) may protect brain tissue from serious ischemic injury. This study aimed to explore neuroprotection by DAPT after cerebral ischemia/reperfusion(I/R) injury. DAPT was intraperitoneally injected 3 hours before the establishment of a focal cerebral I/R model in the right middle cerebral artery of obstructed mice. Longa scores were used to assess neurological changes of mice. Nissl staining and TdT-mediated dUTP-biotin nick-end labeling staining were used to examine neuronal damage and cell apoptosis in the right prefrontal cortex, while immunofluorescence staining was used to detect glial fibrillary acidic protein-and Notch1-positive cells. Protein expression levels of Hes1 and Hes5 were detected by western blot assay in the right prefrontal cortex. Our results demonstrated that DAPT significantly improved neurobehavioral scores and relieved neuronal morphological damage. DAPT decreased the number of glial fibrillary acidic protein-and Notch1-positive cells in the right prefrontal cortex, while also reducing the number of apoptotic cells and decreasing interleukin-6 and tumor necrosis factor-α contents, and simultaneously downregulating Hes1 and Hes5 protein expression. These findings verify that DAPT alleviates pathological lesions and strengthens the anti-inflammatory response after cerebral I/R injury. Thus, DAPT might be developed as an effective drug for the prevention of cerebral I/R injury. | Jun-Jie Wang Jun-De Zhu Xian-Hu Zhang Ting-Ting Long Guo Ge Yan Yu | 2019 | Neural Regeneration Research2019，14，3： | 17 |
| 2 | 2011美国经皮冠状动脉介入治疗指南解读显示文摘自1982年撰写的第Ⅰ版经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous transluminal coronary intervention,PCI)指南问世以来,随着冠心病介入治疗新型器械、药物及研究结果的涌现,美国心脏协会/美国心脏病学会基金会(AHA/ACCF)适时组织专家进行指南的更新[1]。为反映最新的临床研究结果,更好地指导临床实践,2011版指南无论是阐述方式还是涉及内容均具有鲜明的特点:①阐述方式更加简洁、明晰:如在表述相关研究结果时,仅对临床研究结果进行汇总性阐述,而不再对各个研究结果进行解读。 | 吕树铮 汪国忠 | 2012 | 中国医学前沿杂志(电子版)2012，4，6： | 13 |
| 3 | γ-分泌酶抑制剂对正常乳鼠心肌细胞的影响显示文摘目的探讨Notch信号特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对正常乳鼠心肌细胞的影响。方法 SD乳鼠心肌细胞体外分离培养后,与不同浓度DAPT(10μmol/L、5μmol/L、2.5μmol/L、1.25μmol/L、0.625μmol/L、0.3125μmol/L、0.15625μmol/L)孵育24 h,或者与DAPT(5μmol/L)孵育不同时间(1 h、2 h、4 h、8 h、16 h、24 h、48 h),MTT法测定心肌细胞活力;Western Blotting方法测定心肌细胞Notch1受体胞内区(NICD)和Bcl-2蛋白表达量。结果 DAPT显著抑制正常乳鼠心肌细胞的存活,同时浓度越高、时间越长,其抑制效果越明显;DAPT处理后心肌细胞NICD和Bcl-2表达均降低。结论 DAPT可阻断Notch信号通路,抑制正常乳鼠心肌细胞的增殖,促进细胞凋亡。 | 杨阳 段维勋 周京军 毕生辉 杨建宝 冯建宇 侯晓薇 金振晓 易定华 | 2011 | 中国体外循环杂志2011，9，2： | 10 |
| 4 | Notch信号通路在骨形态发生蛋白9诱导的多潜能干细胞成骨分化中的作用显示文摘目的初步探讨Notch信号通路对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导多潜能干细胞成骨分化的作用和机制。方法腺病毒表达载体(AdBM P9/AdGFP、AdHey1/AdRFP)和BMP9/GFP条件培养基处理C2C12细胞,细胞化学染色和活性定量检测早期成骨标志物碱性磷酸酶(ALP),定量RT-PCR检测Notch信号通路靶基因Hey1,以了解Hey1在AdBMP9介导的成骨分化作用中的表达和作用;采用细胞密度实验和Notch信号通路抑制剂(DAPT)检测Notch信号通路对成骨的影响;在AdBMP9/AdGFP处理下,检测细胞上Notch信号通路配体、受体表达变化。结果 AdBMP9作用下,1、3、5、7dALP活性持续增加(P<0.05);Hey1一过性升高,其与AdBMP9呈剂量依赖性;Hey1可协助BMP9成骨(P<0.05),不能单独起效。80%和40%细胞密度组ALP量和Hey1表达均高于20%组(P<0.05);DAPT组中ALP活性明显降低(P<0.05);在AdBMP9作用下,Notch信号通路配受体有不同程度的上调,其中受体Notch4和配体Jag-1上调最为明显(分别为11.3倍和5.1倍)。结论 Notch信号通路参与BMP9介导的多潜能干细胞成骨分化,其可能的机制是BMP9通过诱导Notch通路配体、受体表达上调使Hey1升高,后者协同成骨。 | 刘强 翁亚光 徐道晶 罗敏 唐敏 | 2010 | 第三军医大学学报2010，32，23： | 9 |
| 5 | γ-分泌酶抑制剂干预对鼠心脏成纤维细胞平滑肌肌动蛋白-α及MMP-1/TIMP-1表达的影响显示文摘目的:探讨γ-分泌酶抑制剂(DAPT)抑制Notch信号通路对心肌成纤维细胞(CFs)平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)的表达及细胞外基质(ECM)降解平衡变化的影响。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法分离和纯化SD乳鼠CFs进行体外培养,将CFs分为正常组(N组,培养时不加干预药物)和尾加压素Ⅱ组(U组,加UⅡ10^(-8) mol/L)和DAPT+尾加压素Ⅱ组(D组,同时加入UⅡ10^(-8) mol/L和DAPT 75μmol/L),培养干预48h后采用RT-PCR法测基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、α-SMA和Notch蛋白胞内段(Notch1)mRNA的表达;Western Blot检测α-SMA及Notch1蛋白的表达。结果:U组TIMP-1、α-SMA及Notch1的mRNA表达水平明显高于N组(均P<0.01),MMP-1mRNA的表达和MMP-1mRNA/TIMP-1mRNA比值低于N组(均P<0.01);D组TIMP-1、α-SMA、Notch1的mRNA表达以及α-SMA和Notch1蛋白的表达均较U组下调(均P<0.01),MMP-1mRNA的表达和MMP-1mRNA/TIMP-1mRNA比值较U组上调(P<0.01);但D组上述指标与N组相比差异无统计学意义。结论:DAPT可通过阻断Notch信号通路抑制尾加压素Ⅱ诱导的CFs表型转换,激活胶原降解途径,并可重调MMP-1/TIMP-1平衡,此作用有助于抑制心肌纤维化。 | 丁洁 常煜胤 李文杰 郭冰冰 路明 | 2016 | 临床心血管病杂志2016，32，7： | 7 |
| 6 | DAPT对脑缺血再灌注损伤小鼠学习记忆的影响以及Notch信号通路的调节作用显示文摘目的探讨DAPT对脑缺血再灌注损伤小鼠学习记忆能力的影响,以及Notch信号通路的调控作用。方法 140只健康雄性小鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(I/R组)和DAPT组,每组再分为3d、7d、14d 3个亚组。取材前1 d Y型迷宫检测小鼠学习记忆能力;然后TTC染色测定脑梗死面积;比色法测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量;光学显微镜下观察海马CA3区形态结构变化;免疫荧光检测Hes1阳性细胞;Western blotting检测Hes5蛋白表达变化并进行定量分析。结果与sham组相比,I/R组和DAPT组小鼠学习记忆能力均下降,脑梗死面积增加,SOD活性降低,MDA含量升高(P<0.05)。与I/R组相比,DAPT组小鼠学习记忆能力提高,脑梗死面积减小,SOD活性升高,MDA含量降低(P<0.05)。光学显微镜下,sham组小鼠海马CA3区神经元结构未见异常;I/R组细胞水肿,染色较深,排列疏松,大量神经元缺失,出现核固缩现象;DAPT组细胞数量增加,染色变浅。与sham组相比,I/R组与DAPT组Hes1阳性细胞明显增多,Hes5蛋白表达增加;而DAPT各亚组较I/R各亚组Hes1阳性细胞减少,Hes5蛋白表达降低(P<0.05)。结论 DAPT对小鼠缺血再灌注损伤有改善作用,其作用机制可能与阻断Notch信号通路有关。 | 王俊婕 张先虎 朱俊德 戈果 康朝胜 | 2018 | 解剖学报2018，49，2： | 7 |
| 7 | Notch信号通路对肌成纤维细胞转化中α-SMA表达变化的影响显示文摘目的探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Notch信号后,肌成纤维细胞标志因子α-SMA表达的变化,及Notch信号在肌成纤维细胞转化中的作用。方法采用胰酶消化法,从新出生2-3 d的SD大鼠肺组织中分离肺成纤维细胞,波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学法鉴定培养至第3代的成纤维细胞的纯度,再将细胞分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1+DAPT组;TGF-β1组及TGF-β1+DAPT组加入5 ng/mL的TGF-β1诱导成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,TGF-β1+DAPT组同时加入500 nmol/L的DAPT抑制Notch信号的表达;分别采用RT-PCR法检测α-SMA的mRNA表达变化,Western-blot法检测α-SMA蛋白的表达变化;采用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析,两样本均数比较采用t检验,多个样本均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果 Vimentin免疫细胞化学:几乎100%细胞胞浆内可见棕黄色颗粒及条纹;TGF-β1组α-SMA的mRNA和蛋白的相对吸光度值分别为(0.8510.027)和(0.7850.020),均较对照组(0.3950.018)和(0.3910.022)明显升高;TGF-β1+DAPT组的mRNA和蛋白的相对吸光度值分别为(0.3540.029)和(0.3970.016),均较TGF-β1组显著下降,但与对照组比较无明显差异。结论 TGF-β1可以诱导肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,DAPT可以阻止成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,进而抑制肺纤维化。 | 于秀文 曾林祥 | 2013 | 中国现代医学杂志2013，23，13： | 6 |
| 8 | Notch pathway inhibitor DAPT enhances Atoh1 activity to generate new hair cells in situ in rat cochleae显示文摘Atoh1 overexpression in cochlear epithelium induces new hair cell formation. Use of adenovirus-mediated Atoh1 overexpression has mainly focused on the rat lesser epithelial ridge and induces ectopic hair cell regeneration. The sensory region of rat cochlea is difficult to transfect, thus new hair cells are rarely produced in situ in rat cochlear explants. After culturing rat cochleae in medium containing 10% fetal bovine serum, adenovirus successfully infected the sensory region as the width of the supporting cell area was significantly increased. Adenovirus encoding Atoh1 infected the sensory region and induced hair cell formation in situ. Combined application of the Notch inhibitor DAPT and Atoh1 increased the Atoh1 expression level and decreased hes1 and hes5 levels, further promoting hair cell generation. Our results demonstrate that DAPT enhances Atoh1 activity to promote hair cell regeneration in rat cochlear sensory epithelium in vitro. | Wen-wei Luo Zhao Han Dong-dong Ren Xin-wei Wang Fang-lu Chi Juan-mei Yang | 2017 | Neural Regeneration Research2017，12，12： | 6 |
| 9 | DAPT对牙周膜干细胞体外增殖及成骨分化的影响显示文摘目的:探究Notch信号通路抑制剂DAPT在体外对人牙周膜间充质干细胞(h PDLSCs)增殖及成骨分化能力的影响。方法:体外培养扩增h PDLSCs,流式细胞术检测间充质干细胞特异性标记物CD73、CD90和造血干细胞特异性标记物CD34、CD45的表达。选取第二代生长良好的h PDLSCs,随机分为3组:空白组使用人间充质干细胞培养基,对照组使用人间充质干细胞成骨诱导培养基,实验组使用含1μmol/L DAPT的人间充质干细胞成骨诱导培养基进行体外培养。CCK8检测h PDLSCs增殖能力,绘制增殖曲线;实时定量RT-PCR检测碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)等成骨相关基因及Notch信号通路下游基因(Hes-1、Hey-1)和Notch信号通路配体JAG1的表达;茜素红染色显示矿化结节形成情况。结果:原代培养h PDLSCs表面标记物表达CD73(94.49%)、CD90(98.74%)、CD34(2.07%)、CD45(0.62%);实验组在各检测点的细胞增殖能力与对照组之间无明显差别,两组结果无统计学差异(P>0.05);实验组成骨分化相关基因的表达水平升高(P<0.05),Notch信号通路下游基因表达降低,配体表达升高(P<0.05),细胞染色见实验组矿化结节增多增大。结论:DAPT可提高h PDLSCs体外成骨分化能力,但对增殖无明显影响。 | 张文 方明 鲍东昱 丁晓晨 童昕 秦海燕 | 2018 | 口腔生物医学2018，9，1： | 6 |
| 10 | 2,3,5,4'-Tetra hyd roxystil bene-2-O-β-D-gl ucoside protects murine hearts against ischemia/reperfusion injury by activating Notchl/Hesl signaling and attenuating endoplasmic reticulum stress显示文摘2,3,5,4-Tetrahydroxystilbene-2-O--D-glucoside (TSG ) 是从蓼 multiflorum Thunb 提取的一个水溶性的活跃部件。很多研究证明 TSG 施加 cardioprotective 效果。自从 endoplasmic 蜂窝胃(嗯) 应力在导致的心肌的 ischemia/reperfusion (MI/R ) 起一个关键作用房间 apoptosis,我们寻求了决定 ER 压力的调整是否在 MI/R 损害期间涉及 TSG 的 cardioprotective 行动。雄的老鼠与 TSG 被对待(60 mg ??? ?????????????? ??? 猯'T? 删 ?? 乃 ?????? 瀠瑡潨桰獹潩潬祧吗?? | Meng ZHANG Li-ming YU Hang ZHAO Xuan-xuan ZHOU Qian YANG Fan SONG Li YAN Meng-en ZHAI Bu-ying LI Bin ZHANG Zhen-xiao JIN Wei-xun DUAN Si-wang WANG | 2017 | Acta Pharmacologica Sinica2017，38，3： | 5 |
| 11 | Notch信号通路在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义显示文摘目的探索Notch信号通路对骨关节炎(OA)软骨细胞基质合成的影响及可能的作用机制。方法选择2017年我院收治的8例因膝关节OA行膝关节置换患者的股骨髁软骨作为观察组,再选择1例因外伤行膝上截肢的正常股骨髁软骨作为对照组。所取的标本行组织学检测或细胞分离培养及检测。细胞培养分组按照正常软骨细胞、OA软骨细胞、OA软骨细胞+γ-分泌酶抑制剂DAPT(DAPT组)、OA软骨细胞+重组人Delta4蛋白(DLL4组)。免疫组化定性分析以及Western blot蛋白质印迹技术定量分析Notch-1、Notch-3、Jagged-1、Jagged-2、HES5的表达。结果 Notch信号通路表达水平在OA中发生变化,软骨细胞表型改变,Notch-1、Jagged-1、Jagged-2、HES5表达被激活。γ-分泌酶抑制剂DAPT(20μmol/L)干预Notch信号通路后,抑制OA软骨细胞中Noctch-1、HES5、Jagged-1、Notch-3的表达,对Jagged-2的表达作用不明显。重组人Delta4蛋白(100 ng/μL)干预Notch信号通路后,促进Notch-1、Jagged-2、HES5的表达,对Jagged-1、Notch-3作用不太明显。结论 Notch信号通路表达水平在OA中发生变化;DLL4能激活Notch信号通路,DAPT能抑制Notch信号通路。 | 张清 向明 陈杭 杨国勇 胡晓川 李一平 潘飞旭 邓明月 | 2018 | 局解手术学杂志2018，27，4： | 5 |
| 12 | HBx通过Notch信号通路在正常免疫小鼠体内导致肝癌的作用机制显示文摘目的构建长期携带乙型肝炎病毒X(hepatitis B virus X,HBx)的正常免疫小鼠模型,以探讨HBx在体内导致肝癌发生的机制。方法将转染HBx的肝前体细胞经肝门静脉注射入昆明小鼠体内构建动物模型,分别于术后30、90、180、360 d收取肝脏组织,Western blot和RT-qPCR检测HBx的表达,HE染色观察组织病理切片,Western blot和RT-qPCR检测Notch1、Notch4、Hes1的表达,然后于180 d腹腔注射抑制剂DAPT,Western blot和RT-qPCR检测肝脏细胞凋亡及细胞周期相关因子的表达变化。结果动物模型构建成功且于360 d发生肝癌,与对照组相比,Notch1、Notch4、Hes1的基因及蛋白水平均于30 d呈现显著上调且一直持续至360 d(P<0.05、P<0.05、P<0.001;P<0.05、P<0.05、P<0.01);Bcl-2、CDK4、CyclinE、CyclinD1的蛋白水平在HBx组上调(P<0.001;P<0.01;P<0.001;P<0.01),Bax呈下调(P<0.001),基因水平与其一致(P<0.05;P<0.001;P<0.001;P<0.01;P<0.001),而抑制剂DAPT组显著扭转上述趋势。结论HBx在体内通过持续激活Notch通路引起细胞凋亡及细胞周期异常变化,最终导致肝癌发生。 | 周梦瑶 杜彬 毋楠 黄欣 张思遥 况钦 吴勇 冯涛 | 2021 | 第三军医大学学报2021，43，10： | 5 |
| 13 | γ-分泌酶抑制剂对姜黄素后处理心肌保护作用的影响显示文摘目的探讨Notch信号通路在姜黄素(Cur)后处理抗心肌缺血再灌注损伤(IR)中的作用。方法将40只SD大鼠随机分为对照组、IR组、Cur组、Cur+DAPT组、DAPT组各8只。各组均采用离体心脏Langendoff逆行灌注10 min致心肌缺血,停止灌注80 min后除对照组外其余各组均予KH液行再灌注至150 min。Cur组再灌注液中含1μM浓度的Cur,Cur+DAPT组含1μM浓度的Cur和0.5μM浓度的DAPT;DAPT组含0.5μM浓度的DAPT。监测各组缺血前及再灌注后血流动力学指标,包括心率(HR)、左心室发展压(LVDP)、左心室内压最大变化速率(+dp/dtmax)、冠脉流量(CF);氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死(MI)面积;专用试剂盒测定冠脉流出液(CF)中乳酸脱氢酶水平(LDH);Western blot法检测心肌组织Notch1表达。结果与对照组比较,IR组再灌注后各时间点收缩及舒张功能均显著降低(P<0.01),MI面积显著增加(P<0.01),冠脉流出液LDH含量显著升高(P<0.01),Notch1表达下降(P<0.01);与IR组比较,Cur组上述指标显著改善(P<0.01),Notch1表达上升(P<0.01);与Cur组比较,Cur+DAPT组上述指标显著恶化,且Notch1表达下降(P<0.01);与IR组比较,DAPT组各项指标差异无统计学意义。结论 Cur后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与活化Notch信号通路有关。 | 王宁 段维勋 杨阳 李悦 梁振兴 金振晓 易定华 俞世强 | 2013 | 山东医药2013，53，6： | 4 |
| 14 | DAPT对肺成纤维细胞表型转化中Wnt信号通路的影响显示文摘目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路与Notch信号通路之间存在间接或直接的相互作用以及该信号通路在DAPT抑制肺成纤维细胞增殖中的作用表达。方法:通过使用TGF-β1刺激SD大鼠胚肺成纤维细胞发生表型转化为肌成纤维细胞,并采用DAPT抑制Wnt/β-catenin信号通路,体外纯化肺成纤维细胞,使用细胞免疫荧光检测波形蛋白进行鉴定;分别采用5ng/mLTGF-β1和500nmol/L的DAPT作用于肺成纤维细胞24h,观察其形态学改变;分别采用RT-PCR及Western blot检测wnt1、β-catenin在肺成纤维细胞经TGF-β及DAPT作用24h后的表达情况。结果:与正常组相比较TGF-Β1能显著增加肺成纤维细胞中β-catenin的表达(P<0.05),但加用DAPT后wnt1及β-catenin在肺成纤维细胞中的表达下降(P<0.05)。结论:Wnt/β-catenin信号通路与Notch信号通路之间是存在相互关系的,TGF-β1可使肺成纤维细胞中的β-catenin表达增高;DAPT对于抑制肺成纤维细胞中的wnt/β-catenin信号通路发挥了作用。 | 龚文颖 曾林祥 | 2013 | 实用医学杂志2013，29，2： | 4 |
| 15 | γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Notch信号逆转马兜铃酸诱导的肾小管细胞表型转化显示文摘目的探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对马兜铃酸(AA)诱导引起肾小管上皮细胞表型转化与胶原累积的作用及分子机制。方法将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为正常细胞对照组、AA10 mg·L-1组、AA 10 mg·L-1+DAPT1和10μmol·L-1组。24 h后,实时荧光定量PCR检测Notch信号关键分子Notch1、Jagged1和Numb、表型转化相关分子转化生长因子β1(TGF-β1)、E-钙黏着蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨形态发生蛋白7(Bmp7)和基质成分Ⅰ型胶原a1(Col1a1)和Ⅲ型胶原a1(Col3a1)m RNA的表达;细胞免疫荧光染色法检测Notch1、Jagged1、α-SMA和Col3a1蛋白的表达。结果与正常细胞对照相比,AA处理后,肾小管上皮细胞基质相关因子TGF-β1,α-SMA和Col3a1 m RNA表达上调,上皮标志物E-钙黏着蛋白m RNA的表达受到抑制,而且导致了Notch1、Jagged1 m RNA表达的上调和Numb m RNA表达的下调(P<0.05),提示AA促进肾小管上皮细胞表型转化与基质累积,同时激活了Notch信号通路。DAPT干预AA作用后,Notch1(P<0.01)和Jagged1(P<0.05)的m RNA表达下调,Numb m RNA表达上调(P<0.05),说明DAPT抑制了AA诱导的Notch信号通路活化。此外,与AA损伤组相比,DAPT也降低了TGF-β1,α-SMA,Col1a1和Col3a1 m RNA表达(P<0.05),提高BMP-7和E-钙黏着蛋白m RNA表达(P<0.05),提示DAPT抑制了AA诱导的上皮细胞的表型转化与基质累积。结论 DAPT抑制AA诱导的肾小管上皮细胞的表型转化与基质累积,其可能机制是DAPT靶向干预Notch信号的活化。 | 洪炜龙 陆红 吴存造 夏鹏 陈必成 白永恒 | 2016 | 中国药理学与毒理学杂志2016，30，3： | 4 |
| 16 | 过表达Notch配体Delta-like基因的MLO-Y4骨细胞株的建立及其对骨髓基质细胞成骨分化的作用显示文摘目的建立稳定表达外源Dll1、Dll3、Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株,研究骨细胞Notch信号Delta-like配体Dll1、Dll3、Dll4对骨髓基质细胞成骨分化的影响。方法用过表达Dll1、Dll3、Dll4基因的重组慢病毒液感染MLO-Y4样骨细胞,嘌呤霉素筛选分别稳定表达Dll1、Dll3及Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株。采用实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative,qPCR)对筛选出来的MLO-Y4骨细胞株中Dll1、Dll3及Dll4基因的表达进行鉴定。将3种细胞株分别与野生型小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)进行共培养,采用碱性磷酸酶(ALP)染色及ALP定量检测共培养3 d ALP活性变化;qPCR检测共培养3 d成骨相关标志基因及Notch信号靶基因的表达水平,在使用Notch信号抑制剂DAPT后检测上述指标。结果与阴性对照组相比,Dll1、Dll3及Dll4转染组中Dll1、Dll3及Dll4 mRNA的水平显著增加(P<0.05)。共培养3 d后,骨细胞中Dll4基因的过表达促进了BMSC的ALP活性,与阴性对照组相比有统计学差异(P<0.05)。qPCR结果显示,MLO-Y4-Dll4组的ALP、Runx2、OPN及CollagenⅠ成骨相关标志基因的表达均有所升高(P<0.05),Notch信号靶基因Hey1、HeyL、Hes1及Hes7的表达也有所升高(P<0.05)。而在加入DAPT后,MLO-Y4-Dll4组的ALP活性下降,成骨相关标志基因及Notch信号靶基因的表达有所下降(P<0.05)。结论建立了稳定表达外源Dll1、Dll3或Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株,在骨细胞中过表达Dll4能促进骨髓基质细胞的早期成骨分化,经典Notch信号通路在其中可能发挥了重要作用。 | 冯玮 谢正松 罗岑 涂小林 | 2020 | 第三军医大学学报2020，42，9： | 4 |
| 17 | γ分泌酶抑制剂DAPT对胰腺癌细胞生长的影响显示文摘目的探讨γ分泌酶抑制剂DAPT对人胰腺癌细胞生长的影响及其可能机制。方法选用胰腺癌细胞株AsPC-1、BxPC-3、MIAPaCa-2作为实验研究对象,应用不同剂量(100μmol/L,50μmol/L,10μmol/L)的DAPT作用不同时间后,CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡。结果与空白对照组相比,100μmol/L DAPT作用时3株胰腺癌细胞从3d开始出现增殖抑制(P<0.05);50μmol/L DAPT作用时AsPC-1细胞在5d出现增殖抑制(P<0.05),BxPC-3和MIAPaCa-2细胞在3~5d出现了抑制(P<0.05);10μmol/L DAPT作用时仅BxPC-3和MIAPaCa-2细胞在5d出现了生长抑制(P<0.05)。流式细胞术显示DAPT作用组细胞凋亡率较空白对照组增加。结论应用DAPT阻断Notch信号通路可通过促进胰腺癌细胞凋亡而抑制胰腺癌生长。 | 杜潇 程中 李旸 周总光 杨烈 张明鸣 | 2013 | 四川大学学报(医学版)2013，44，5： | 4 |
| 18 | γ-分泌酶抑制剂对脑缺血大鼠神经干细胞移植后神经保护作用显示文摘目的探讨γ-分泌酶抑制剂(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)对脑缺血大鼠神经干细胞(NSCs)移植后的神经保护作用。方法 SD大鼠33只,脑缺血模型制造成功后,随机平均分为3组:模型组、神经干细胞移植组(移植组)、DAPT+移植组。另假手术组11只仅在麻醉状态下分离暴露血管。NSCs移植后7 d观察各组大鼠神经行为学改变; TTC染色观察脑梗死体积;尼氏染色观察脑组织病理形态学变化;免疫荧光双标检测Brd U/神经元核抗原(Neu N)阳性细胞表达。结果假手术组神经功能学评分为零,无脑梗死灶,细胞形态完好,尼氏小体丰富,Brd U/Neu N阳性细胞表达阴性;与假手术组相比,模型组神经功能学评分增加,有明显神经功能缺损症状,可见明显脑梗死灶,神经细胞排列紊乱,可见核固缩,尼氏小体稀少,存活神经元数量显著减少(P<0. 05),有少量Brd U/Neu N阳性细胞表达(P<0. 05);与模型组比较,移植组和DAPT+移植组都有不同程度神经功能评分减低,脑梗死体积缩小,神经细胞存活数量增加(P<0. 05),Brd U/Neu N阳性细胞表达增多(P<0. 05),以DAPT+移植组各项指标恢复最为明显。结论 DAPT能够促进移植的NSCs向神经元分化,对脑缺血大鼠神经干细胞移植后有神经保护作用。 | 刘宗秀 张紫微 周晓红 成媛 高维娟 | 2019 | 解剖学报2019，50，2： | 4 |
| 19 | DAPT对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖和凋亡的影响显示文摘本研究旨在探讨DAPT对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226体外增殖的抑制作用及相关机制。用CCK-8法检测RPMI8226细胞的增殖率,用流式细胞术检测凋亡率,用Western blot法检测RPMI8226细胞Notchl、Hes1蛋白表达情况。结果表明,DAPT 0.5-5.0μmol/L作用于RPMI8226细胞24-72 h后,细胞增殖水平明显下降,呈时间和浓度依赖性(r=1.000)。不同浓度的DAPT能诱导RPMI8226细胞发生凋亡,与对照组相比差异有统计学显著性;随着DAPT浓度的增加,Notch1、Hes1蛋白的表达逐渐下调(rNotch=-0.979,rHes1=-0.988)。结论:DAPT能够抑制RPMI8226细胞的增殖,其机制可能与RPMI8226细胞中Notch1、Hes1蛋白的下调有关。 | 原莹莹 曾志勇 陈君敏 | 2012 | 中国实验血液学杂志2012，20，4： | 4 |
| 20 | 钝挫伤及力竭运动对大鼠骨骼肌卫星细胞激活及Pax7/CBF1/DAPT含量的影响显示文摘目的:研究钝挫伤及力竭运动对大鼠骨骼肌卫星细胞激活及Pax7/CBF1/DAPT含量的影响,探索损伤修复的机制。方法:取7周龄雄性SD大鼠24只,分为4组,每组6只:安静对照组(C组);力竭运动即刻组(E0组);力竭运动后24 h组(E24组);力竭运动后48 h组(E48组)。另取18只SD大鼠,分为3组,每组6只:钝挫伤即刻组(Do组);钝挫伤后24 h组(D24组);钝挫伤后48 h组(D48组)。各组分别于安静状态、力竭运动后和钝挫伤后不同时间点,宰杀取血,分离血清。并取下右侧腓肠肌,将腓肠肌分为二份,一份立即进行细胞培养实验,另一份和血清一起在-80℃冰箱保存,用ELISA法检测Pax7、CBF1、DAPT的含量变化。另取新生3日龄鼠3只,宰杀后同样取右侧腓肠肌进行细胞培养实验。结果:(1)体外培养结果显示:新生鼠1天后即可见到梭形卫星细胞,其它各组的肌卫星细胞增长速度较慢,到第3天、第5天时各组开始大量增殖梭形细胞,且一直保持增殖良好并传代,第7天仍有较好的长势,且出现部分融合和微管。各组比较显示,安静对照组未见卫星细胞增殖;新生鼠卫星细胞数量最高,增殖速度也最快;而钝挫伤组的肌卫星细胞数量及增殖速度显著高于力竭运动组。(2)ELISA结果显示:力竭运动组和钝挫伤组各组骨骼肌、血清中CBF1和Pax7的含量与安静对照组相比均显著上调(P<0.05),其中D0组的CBF1含量差异极显著(P<0.01),明显高于其他各组(P<0.05);D24、D48两组的Pax7含量亦明显高于其他各组(P<0.05)。而DAPT在各组骨骼肌、血清中的含量与安静对照组相比均显著下调(P<0.05),其中D0组DAPT差异极显著(P<0.01)且明显低于其他各组(P<0.05)。但力竭运动各组(E0、E24、E48)之间无显著性差异。结论:(1)钝挫伤及力竭运动可使肌卫星细胞激活、增殖分化,并且钝挫伤导致的肌卫星细胞的激活数量明显高于力竭运动组,可能由于钝挫伤的刺激更强所致。(2)钝挫伤和力竭运动可以使大鼠骨骼肌和血清Pax7和CBF1的含量上升,但下调DAPT的含量。Pax7和CBF1可能在骨骼肌卫星细胞激活及骨骼肌损伤修复中起着正向调节的作用,而DAPT可能起着负向调节作用。 | 潘同斌 叶雷雷 马兵 李娜 仝昕炜 汪亚如 | 2018 | 中国运动医学杂志2018，37，5： | 4 |
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