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| 1 | 山东省免疫猪场猪伪狂犬病病毒分离鉴定及gE毒力基因的序列分析显示文摘为了解山东省使用Bartha-K61疫苗免疫猪场猪伪狂犬病(PR)流行的原因,本研究对2013和2014年采自山东省免疫猪场的PR疑似病料进行了猪伪狂犬病病毒(PRV)的分离鉴定,并对分离毒株的毒力基因gE进行了序列测定与分析。结果表明,共分离到12株PRV,TCID50介于10^(-7.1)/0.1mL与10^(-9.5)/0.1mL之间。12株PRV的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为99.9%~100.0%和99.7%~100.0%;与亚洲毒株的核苷酸和氨基酸序列的同源性均高于欧美毒株。gE基因的氨基酸进化树分析表明,包括本研究分离的12株PRV在内的所有42株亚洲毒株属于GⅠ型,所有欧美毒株属于GⅡ型。这2个基因型之间分别在第58,105,148,178,180,214,215,470,500,505,518,522,569位氨基酸存在明显差异,可作为鉴别PRV欧美毒株与亚洲毒株的遗传标志。 | 陈超 刘存 李海娥 薛瑞雪 田野 孙圣福 张月 孙振 姜世金 田夫林 | 2016 | 中国兽医学报2016，36，6： | 18 |
| 2 | 荧光RT-PCR检测鱼类鲤春病毒血症病毒的研究显示文摘本研究根据鲤春病毒血症病毒的核酸保守区序列,开发、设计多条引物和探针序列,从中筛选敏感、特异的引物、探针,在循环参数、病毒核酸提取方法及逆转录条件优化的基础上,建立了快速的检测鲤春病病毒的荧光RT-PCR检测技术。同时,又将该方法与一步法RT-PCR方法和细胞查毒方法进行了互相验证和对比研究,结果表明,荧光RT-PCR方法检测病毒悬液的灵敏度最高,病毒悬液10-6稀释仍然可以检出,而细胞分离病毒方法测得的TCID50为10-4。本文还对北京地区出口渔场送检样品、人工实验感染该病毒鱼的病料进行了组织脏器中病毒分布和病毒含量的研究。结果显示,北京地区出口渔场送检样品未见细胞病变,所有检测样品均为阴性;病毒致死鱼的肠道病毒含量最高,肠组织研磨稀释10-4倍仍然可以检出;其次是肾和鳃组织,检出极限为稀释10-3倍组织悬液;肉和脑组织中病毒含量较低,肉最高能检出10-2倍组织悬液,而脑组织只能检出10-1倍组织稀释液。 | 张利峰 张鹤晓 乔卫虹 吴丹 高小博 杨伟 王莉 夏春 | 2005 | 检验检疫科学2005，15，6： | 17 |
| 3 | A Highly Pathogenic Strain of Porcine Deltacoronavirus Caused Watery Diarrhea in Newborn Piglets显示文摘Porcine deltacoronavirus(PDCoV) is a newly identified virus that causes watery diarrhea in newborn piglets and results in significant economic losses to the pig industry. Since first reported in Hong Kong in 2012, PDCoV has been subsequently detected in USA, South Korea, Thailand, and China's Mainland. Here we isolated a strain of PDCoV, named CHN-GD-2016,from the intestinal content of a diseased newborn piglet with severe diarrhea in a pig farm in Guangdong, China. PDCoV CHN-GD-2016 could be identified by immunofluorescence with PDCoV specific rabbit antisera, and typical crown-shaped particles with spiky surface projections of this PDCoV were observed with electron microscopy. Genomic analysis showed that the PDCoV CHN-GD-2016 was closely related to other Chinese PDCoV strains, with the highest sequence similarity with the strain CHN/Tianjin/2016. Importantly, inoculation of newborn piglets with 1×10~5 TCID_(50) of CHN-GD-2016 by oral feeding successfully reproduced clear clinical symptoms, including vomiting, dehydration, and severe diarrhea in piglets. In addition, the virus RNA in rectal swabs from 1 to 7 days post inoculation was detected, macroscopic and microscopic lesions in small intestine were observed, and viral antigen was also detected in the small intestines with immunohistochemical staining. Collectively, the data show in this study confirms that PDCoV is present in Guangdong,China and is highly pathogenic in newborn piglets. | Zhichao Xu Huiling Zhong Qingfeng Zhou Yunping Du Li Chen Yun Zhang Chunyi Xue Yongchang Cao | 2018 | Virologica Sinica2018，33，2： | 16 |
| 4 | 猪繁殖与呼吸综合征病毒TCID_(50)的测定显示文摘本文建立一种测定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)滴度的新方法-免疫染色法。用免疫染色法测得病毒在Mark-145细胞系上的滴度为105.8TCID50/0.1ml,常规法测得病毒滴度为105.2FCID50/0.1ml,这表明前者敏感性和准确率高于后者。 | 韩先杰 王宏伟 王金宝 | 2005 | 莱阳农学院学报2005，22，2： | 14 |
| 5 | Determination of 50% endpoint titer using a simple formula显示文摘Two commonly used methods for calculating 50% endpoint using serial dilutions are Spearman-Karber method and Reed and Muench method. To understand/apply the above formulas, moderate statistical/mathematical skills are necessary. In this paper, a simple formula/method for calculating 50% endpoints has been proposed. The formula yields essentially similar results as those of the SpearmanKarber method. The formula has been rigorously evaluated with several samples. | Muthannan Andavar Ramakrishnan | 2016 | World Journal of Virology2016，5，2： | 12 |
| 6 | IFA和IPMA方法测定猪瘟兔化弱毒病毒含量显示文摘使用间接免疫荧光方法(IFA)和过氧化物酶单层试验(IPMA)测定猪瘟兔化弱毒的病毒含量(TCID50)。两种方法都使用韩国JBT公司猪瘟单抗作为一抗,此单抗的稀释倍数最高为300倍。Trueblue过氧化物酶底物显色的、感染猪瘟兔化弱毒的阳性细胞呈现蓝色,易于辨识,所以确定Trueblue为IPMA方法中的酶作用底物。建立的的IFA和IPMA方法与兔体反应热法进行了比较,证明两者存在一定平行关系,但IFA和IPMA比兔体反应热法检测结果的数值低1个数量级左右。基于以上结果,TCID50方法可作为猪瘟疫苗效力检验的候选方法。 | 李晶梅 朱薇 秦红刚 靖志强 廖园园 于义娟 肖敏 袁刚 谢红玲 漆世华 温文生 | 2013 | 中国兽药杂志2013，47，10： | 10 |
| 7 | 中药金银花体外抗牛病毒性腹泻病毒的作用研究显示文摘为了研究中药金银花是否具有抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)活性的作用,试验首先测定了金银花对牛肾细胞(MDBK细胞)的最佳用药浓度,用该浓度的金银花对在细胞内和细胞外两种状态的BVDV进行试验。细胞外试验中,把BVDV与金银花在体外混合,作用0,6,12 h后接种MDBK细胞,以研究金银花在细胞外抗BVDV活性作用。细胞内试验中,将BVDV先接种至MDBK细胞,然后用含金银花的细胞维持液培养1 h,最后用细胞维持液继续培养24,36,48 h,以观察金银花对BVDV复制的影响。采用免疫荧光试验、病毒半数组织细胞感染量(TCID50)测定及荧光定量PCR方法,检测金银花对BVDV活性和复制的影响。结果表明:当金银花浓度为2.5×10-2 g/mL时,对细胞的毒性最小。因此,用该浓度的金银花对BVDV在细胞内和细胞外两种状态进行试验。细胞外试验组免疫荧光试验结果显示,金银花与BVDV作用0 h,培养72 h后,仍有特异性荧光;而金银花与BVDV作用6 h和12 h,培养72 h后则无特异性荧光出现,表明在细胞外金银花对BVDV活性起到了良好的抑制作用。随着金银花与BVDV在体外作用时间的增加,病毒对照组TCID50极显著高于试验组(P<0.01)。BVDV与金银花作用0,6,12 h后感染细胞,试验组与病毒对照组样品中BVDV mRNA相对含量均差异极显著(P<0.01)。细胞内试验组免疫荧光试验结果显示,金银花作用24 h样品仍有少量特异性荧光,而作用36 h和48 h样品则无特异性荧光。随着金银花与BVDV作用时间的增加,病毒对照组TCID50逐渐增大;而试验组TCID50基本不变,与病毒对照组差异极显著(P<0.01)。细胞内的BVDV与金银花作用36,48 h后,试验组与病毒对照组样品中BVDV mRNA相对含量差异极显著(P<0.01)。说明金银花可对细胞内外的BVDV活性起到良好的抑制作用,可以抑制BVDV的活性。 | 刘占悝 李智杰 刘泽余 李健友 张淑琴 王超 郭利 | 2020 | 黑龙江畜牧兽医2020，，14： | 9 |
| 8 | 氧化苦参碱体外抗病毒性心肌炎试验研究显示文摘目的:研究氧化苦参碱对柯萨奇B_3病毒(CVB_3)所致的VERO和大鼠原代心肌细胞病变抑制作用、病毒繁殖抑制反应,并测定其对大鼠原代心肌细胞培养上清液中心肌酶(LDH、CK-MB)活性的影响。方法:在VERO细胞、大鼠原代心肌细胞中加入不同稀释度氧化苦参碱后,感染CVB_3病毒,观察细胞病变,MTT染色比较各组间活细胞数的变化,病毒繁殖抑制实验比较半数组织感染量(TCID_(50))的差别:紫外分光光度法测定心肌细胞培养上清液LDH和CK-MB活性。结果:氧化苦参碱在VERO和心肌细胞实验中可有效抑制CVB_3病毒引起的细胞病变(P<0.01)及病毒的繁殖,对心肌细胞释放心肌酶也有一定的抑制作用(P<0.05)。结论:氧化苦参碱对CVB_3病毒感染的VERO和心肌细胞具有保护作用。在一定浓度下可降低心肌酶的释放。其作用机制尚需做进一步实验来探讨。 | 刘小雷 宿瑞俊 贾秀珍 惠汝太 | 2003 | 中国分子心脏病学杂志2003，3，3： | 9 |
| 9 | 猪轮状病毒四川株的分离鉴定及增殖规律显示文摘为了解猪轮状病毒(PoRV)在MARC-145细胞系上的培养特性及增殖规律,本试验利用MARC-145细胞,从四川仔猪腹泻样品中分离到1株PoRV,并通过PCR检测、病毒理化实验与微量中和实验证实,命名为SC-R株。用含不同浓度胰酶营养液培养SC-R株48h后,分别收集病毒液进行定量分析;同时,以SC-R分离株感染MARC-145细胞,在感染后不同时间分别收集感染病毒液,利用PoRV荧光定量检测方法对不同样品中病毒RNA进行定量分析,绘制PoRV生长曲线。结果表明,用含3%胰酶营养液培养的细胞液中PoRV的RNA含量明显高于其他组;-步生长曲线显示细胞外病毒RNA含量呈“s型”曲线增长,感染后0~8h为潜伏期,病毒RNA含量维持在较低水平;8~36h为突破期,病毒RNA含量呈对数增长;感染48h增长速度减缓,维持在较高水平,逐步进入稳定期。胰酶可增加PoRV对细胞的感染性,3%是本试验最为适用的胰酶浓度;PoRV感染MARC-145后在细胞内增殖并逐步释到细胞外。 | 杨文宇 朱玲 周远成 郭万柱 徐志文 | 2014 | 中国兽医学报2014，34，2： | 8 |
| 10 | 核酸杂交技术在禽白血病病毒TCID_(50)测定中的应用显示文摘为探索核酸杂交技术在测定J亚群禽白血病病毒(ALV-J)细胞半数感染量(TCID50)中的可行性,将ALV-J传染性克隆r NX0101株以10倍梯度稀释后按常规方法接种已长满单层鸡胚成纤维细胞(CEF)的96孔板,在维持7 d后收集细胞培养上清。上清液部分按照试剂盒说明书进行p27抗原的ELISA检测,另一部分提取RNA后以鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒进行Dot-blot检测,每孔中细胞固定后以ALV-J特异性单克隆抗体进行IFA检测,确定病毒感染孔后按照Reed-Muench法分别计算三种方法测定的TCID50。结果显示ELISA法、IFA法和Dot-blot法在确定病毒感染中能够相互验证和补充,该病毒在CEF的TCID50分别为10-4.7TCID50/0.1 m L、10-5.2TCID50/0.1 m L和10-5.3TCID50/0.1 m L。表明采用Dot-blot法测定ALV-J的TCID50是可行的,不仅能够排除内源性的干扰,并且比ELISA和IFA具有更高的灵敏度。 | 孟凡峰 范建华 徐步 时建蓬 董宣 崔治中 赵鹏 | 2015 | 中国家禽2015，37，1： | 7 |
| 11 | 猪圆环病毒2型陕西杨凌株的分离鉴定及全基因组分析显示文摘【目的】分离得到猪圆环病毒2型(PCV-2)陕西杨凌株,测定病毒滴度(TCID50),并进行全基因组序列比对,为研制针对性更强的PCV-2疫苗提供理论依据。【方法】从经PCR检测为猪圆环病毒2型阳性的病料中,分离病毒并接种PK-15细胞,通过PCR检测、间接免疫荧光试验及电镜观察,对分离病毒进行鉴定;用免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA),测定分离毒株的TCID50,并对其全基因组序列进行测定与分析。【结果】分离得到1株猪圆环病毒2型毒株,分离株在PK-15细胞上的TCID50为10-4.75。全基因组序列同源性比对发现,分离株与一加拿大分离株(DQ200735)同源性最高(99.4%)。【结论】从陕西杨凌分离得到了1个猪圆环病毒2型分离株。 | 汤智慧 郭抗抗 张彦明 王津津 李宇立 向华 | 2011 | 西北农林科技大学学报(自然科学版)2011，39，4： | 7 |
| 12 | 亚甲兰光化学法红细胞病毒灭活的初步探讨显示文摘目的 探讨择定条件下亚甲兰光化学方法对红细胞悬液的病毒灭活效果及其对红细胞质量指标的影响。 方法 在国产 PVC储血袋内的 GMA红细胞悬液中预置 VSV和 Sindbis病毒 ,加入终浓度为 5μmol/L的亚甲兰后用380 0 0 lx荧光照射 60分钟 ,测定处理后红细胞悬液及其匀浆中的病毒滴度及保存 2 1天内各时间段的红细胞 ATP、2 ,3-DPG、上清 K+ 和游离血红蛋白等质量指标。 结果 经上述方法处理后 ,红细胞悬液上清和红细胞匀浆中的 VSV病毒滴度分别降低 8.87± 0 .4 2 lg TCID50 和 7.79± 0 .90 lg TCID50 ;Sindbis病毒滴度则分别降低 6.5 8± 1 .67lg TCID50 和 5 .0 8±1 .4 2 lg TCID50 :处理后保存 2 1天内的各时间段红细胞主要质量指标未发生明显不良变化。 结论 亚甲兰光化学方法能有效灭活红细胞悬液及红细胞匀浆中与细胞相关的脂质包膜模型病毒 。 | 钱开诚 陆萍 凌冰 黄宇闻 高峰 张钦辉 | 2001 | 临床输血与检验2001，3，3： | 7 |
| 13 | 敲减单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)UL30蛋白表达可抑制HSV-2复制显示文摘按照shRNA(small hairpin RNA)设计要求,选择编码单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA多聚酶催化亚单位的UL30(unique long 30,UL30)基因序列保守区域,设计、合成并构建表达UL30序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pUL30.通过磷酸钙转染法将其转染入HEK(human embryonic kidney)293细胞中,用蛋白印迹法检测对HSV-2 UL30蛋白表达的影响,观察受染细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),终点滴定法测定细胞上清液中病毒感染滴度(50%tissue culture infective dose,TCID50).结果表明,针对UL30基因的siRNA能有效抑制UL30蛋白表达,同时显著抑制受染细胞的CPE,降低上清液中病毒感染滴度.提示本研究建立的针对UL30基因特异性siRNA能有效阻断HSV-2在HEK293细胞内的复制,UL30基因是一个潜在的抗HSV-2复制的药物靶标. | 冯海 张浩 屠静 罗凌琪 周琦 彭宜红 | 2007 | 中国生物化学与分子生物学报2007，23，12： | 7 |
| 14 | 禽腺病毒江苏分离株的细胞培养特性显示文摘为进一步研究的生物学特性,应用鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肾细胞(CEK)培养禽腺病毒江苏分离株,进行培养特性、血凝特性、理化特性、超薄切片观察和PCR检测。实验结果表明,CEF感染病毒后没有出现病变。CEK感染病毒后则表现出很强的聚集性并形成细胞团,有的成束状,最后脱落;ReedMuench方法测得其TCID50为每0.1mL10-5.4。CEK核内存在大量70~80nm、呈典型的晶格状排列的腺病毒颗粒。 | 周斌 郑其升 刘华雷 曹瑞兵 陈溥言 | 2005 | 南京农业大学学报2005，28，2： | 6 |
| 15 | BHK-21细胞稳定测定猪乙型脑炎病毒半数细胞感染量效价(TCID_(50))的条件优化及应用显示文摘为建立BHK-21细胞测定乙型脑炎病毒(Japenese encephalitis virus,JEV)病毒效价的方法,对96孔细胞板中不同初始接种量BHK-21细胞在多种维持液中的生长状态进行探讨,发现当BHK-21细胞以1250~2500个/孔接种96孔板培养24 h后,更换含3%新生牛血清的DMEM后在37℃、5%CO2条件下可至少良好维持72~96 h。在此条件下并基于Reed-Muench法测定病毒效价的原理,本文建立了准确测定JEV TCID50的方法,利用该方法对JEV野毒分离株及商品疫苗进行测定,均获得稳定、准确的病毒效价。本实验为JEV的体外培养、病毒定量、疫苗评价等提供了一种准确、稳定、易判定的参考方法。 | 滕蔓 罗俊 樊剑鸣 邢广旭 赵东 杨苏珍 张改平 | 2010 | 中国动物传染病学报2010，18，6： | 6 |
| 16 | 应用TCID50法比较4种细胞对呼吸道腺病毒的敏感性显示文摘目的建立腺病毒滴度测定的TCID50方法,并比较MDCK、Vero、HEp-2及A549 4种细胞对人呼吸道腺病毒的敏感性。方法将腺病毒作连续10倍稀释,每个稀释度取100μl加入96孔细胞培养板中,随后加入消化的宿主细胞100μl,每个稀释度作10个重复,并设空白细胞培养对照。置37℃,5%CO2培养箱中。逐日观察细胞病变,并记录细胞病变孔数,直到对照细胞老化脱落为止,按Reed-Muench法计算病毒的TCID50。结果呼吸道腺病毒可在MDCK、Vero、HEp-2及A549四种细胞中增殖,并出现典型细胞病变,在观察期内A549和Vero细胞能测出TCID50值。结论四种细胞对腺病毒的敏感性依次为A549>Vero>Hep-2>MDCK。 | 杨海玉 马智龙 | 2014 | 现代预防医学2014，41，23： | 6 |
| 17 | 猪伪狂犬病病毒四川株的分离鉴定及UL43基因序列分析显示文摘从四川某猪场发病仔猪体内分离到1株病毒,该毒株能在Vero、MDBK、PK15、ST、MDCK、BHK21、Marc145、鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖并产生细胞病变。通过蚀斑克隆对其进行纯化,克隆毒株在Vero细胞上为3.0×107TC ID50/0.1mL。该病毒在Vero细胞上连传15代,其TCID50变化很小。病毒对5-溴脱氧尿核苷、氯仿敏感。用该病毒接种家兔和仔猪均出现典型的伪狂犬病症状,gE-ELISA检测接种分离毒的仔猪血清,伪狂犬病毒(PRV)抗体阳性。电镜观察可见直径110~140 nm的典型疱疹病毒粒子。上述结果表明分离株为PRV,并命名为SE株。根据已发表的UL43序列设计1对引物,以分离毒株基因组DNA为模板进行PCR扩增,对目的产物进行克隆及测序分析,结果与GenBank收录的其他PRV毒株(Becker、Ea)的UL43核苷酸序列同源性为98.8%,氨基酸同源性分别为95.2%、97.3%。 | 王小玉 李小欢 郭万柱 左健 韩国全 李宇 徐志文 王印 朱玲 Xiao-yu Xiao-huan Wan-zhu Guo-quan Zhi-wen | 2010 | 畜牧与兽医2010，，10： | 6 |
| 18 | 利用RNA干扰机制抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的增殖显示文摘本文探讨依靠RNAi技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的干扰作用。筛选到针对编码PRRS病毒核衣壳蛋白的N基因的两处靶序列作为候选片段,在MARC-145细胞上进行基因干扰实验研究。成功观测到由载体表达的小干扰RNA(siRNA)在MARC-145细胞中对PRRS病毒增殖的抑制现象。通过选取不同时间段对病毒进行TCID50检测,以及对CPE出现时间进行观察和免疫荧光技术,得到RNA干扰对PRRS病毒增殖抑制作用的动态数据。证实在真核细胞水平上,RNA干扰机制可以抑制PRRS病毒的增殖。实验结果表明,依靠载体表达的RNA干扰技术将会对今后针对PRRS病毒的新型疫苗开发提供一个新思路。 | 高晓飞 包晶晶 陈勇军 陈溥言 | 2006 | 中国病毒学2006，21，3： | 6 |
| 19 | 松果提取物的体外抗腺病毒活性研究显示文摘用95%的乙醇沸腾回流提取,制备松果提取物。MTT法确定提取物对细胞的最大无毒浓度;用梯度滴定法观察腺病毒所携带的绿色荧光蛋白基因的蛋白表达量确定病毒液的效价(TCID50);参照所得数据,设计3个松果提取物潜在的抗腺病毒靶位,分别探究松果提取物对腺病毒的直接灭活作用、对病毒吸附的抑制作用和对病毒生物合成的抑制作用。结果表明,试验所用腺病毒原液感染HEK293细胞的效价为106.1 TCID50/mL;乙醇溶剂和松果提取物均对腺病毒具有直接灭活作用,但提取物可以加强这种灭活作用;两者对于腺病毒的吸附并不起什么作用;松果提取物能够抑制腺病毒的生物合成作用,而且该抑制效果较乙醇更为显著。 | 王洪斌 董丹 许冰 周向红 阎斌伦 | 2011 | 湖北农业科学2011，50，3： | 6 |
| 20 | 一株2型牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及其在MDBK细胞上的克隆纯化显示文摘为了解牛病毒性腹泻病毒(BVDV)在猪用活疫苗生产过程中的污染情况,利用抗原捕获ELISA方法对用于制作原代睾丸细胞的犊牛血清进行检测。将检测结果为阳性的1份犊牛血清,接种于MDBK细胞上,盲传3代,出现明显细胞病变。用BVDV 5′-UTR端特异性引物进行RT-PCR扩增,并对扩增片段进行克隆测序和序列分析。结果表明,分离得到一株2型牛病毒性腹泻病毒,并将其命名为JN-2。将该病毒用蚀斑方法进行克隆纯化,并对纯化前后病毒的TCID50进行测定比较,结果发现纯化后病毒滴度显著提高。 | 聂兆晶 田夫林 姜世金 | 2012 | 西北农业学报2012，21，1： | 6 |
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