| 1 | 检测冰冻肝组织切片中丙型肝炎病毒RNA的一种快速和高度特异性方法显示文摘目的:建立一种简单适用的以多聚酶链式反应(PCR)为基础的方法,以便快速、高度特异性地从单份冰冻组织切片提取的RNA中检测HCV核酸。方法:对18例施行原位肝移植患者的肝组织进行HCV RNA的检测,其中9名患者有HCV抗原血症(EIA-2,RIBA-2)和病毒血症(PCR),另9名正常。从每名患者标本的组织切片(1~10μm)中抽提出总RNA,一部分采用常规的逆转录套式PCR(RT-nestded PCR)进行检测,包括引物特异的逆转录和套式RCR,两对寡核苷酸引物来自于HCV RNA 5′端非编码区。另一部分采用组合RT-nested PCR检测,即逆转录与第一次PCR在同一离心管中进行,整个过程只需5小时。管中用以隔开逆转录酶(RTase)与Taq DNA聚合酶的石蜡界面可有可无。验证试验采用斑点印迹杂交,能够与地高辛(DIG)标记的寡核苷酸探针进行杂交的标本为HCV阳性。结果:运用常规的分步RT-PCR与组合RT-PCR两种检测方法,发现9例HCV阳性患者其肝组织中HCV RNA为阳性,9例外周血中HCV阴性患者其肝组织中HCV RNA亦为阴性。少至500ng的肝组织总RNA作为模板也能产生在EB染色的琼脂糖凝胶上可检测到的cDNA扩增产物。DIG标记的Alx-89寡核苷酸探针仅与HCV RNA阳性标本杂交。结论:组合RT-PCR能够在一种通用缓冲体系中一步完成逆转录和第一次PCR,高度特异性地直接检测肝组? | C.Sergi T.Goeser G.Otto H.F.Otto W.J.Hofmann 杨燕 | 1997 | 德国医学1997，14，1： | 0 |
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